液相色谱柱的应用dingv备课讲稿.ppt

三基封端技术（酰胺基） PG=极性酰胺基，R1=空间保护的异丙基，R=烷基链 柱子稳定性更好，寿命更长 超临界封端技术 传统封端：固-液回流封端，封端试剂和催化剂溶于有机溶剂中（甲苯），与键合相在有机溶剂沸腾温度回流数小时至数天不等。硅胶小孔难到达。 超临界封端：封端试剂和催化剂由CO2超或亚临界流体传递，封端试剂在超或亚临界流体状态下扩散系数是固-液回流状态的1000倍，能充分扩散到硅胶表面和小孔内部，只需要数小时就可以最大限度封闭活性硅羟基。 碱灭活测试 色谱柱 Diamonsil（钻石）C18 5um，250 x 4.6mm 流动相 CH3OH/ H2O (49:51) 流速 1.0 mL/min 检测 UV@254nm 如果硅胶表面已经被完全化学改性，乙基苯胺的三个异构体将不会与硅胶发生非极性作用力，所以不会分离并共同洗脱出来。 封端技术比较 保留值与pH的关系 pH变化值 0.1 RS变化值1.6 色谱柱：Zorbax StableBond C18 4.6 X 250mm, 5um 部件号：880975-906 流动相：27%甲醇：73%磷酸 pH 2.5 2.6 温度：500C 流速： 1.0mL/min. 保留值与pH的关系 1 2 3 4 6 7 5 0 1 2 3 4 5 6 Time (min) 0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 6 7 5 Time (min) pH 7.00 pH 7.25 色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.6 x 75 mm, 3.5 μm 流动相: 44% 25 mM磷酸, pH 7.00 : 56% 甲醇 流速: 1.0 mL/min 温度: 25°C 检测: UV 250 nm 可电离的组份的分离可能会随pH变化发生显著变化 —甚至很小的 0.05–0.25 个pH变化单位. 样品: ketoprofen ethyl paraben Hydrocortisone fenoprofen propyl paraben Propranolol ibuprofen 0.25 个pH pH值对保留时间的影响 碱性条件保留时间 随PH变化明显，PH 变化0.2，保留时间 变化1.2min。 保留时间 随PH变化 不明显 酸性条件保 留时间随PH 变化明显 保留值与pH的关系 保留时间 酸性组份 中性组份 碱性组份 复杂组分的流动相pH选择技巧 色谱柱: ZORBAX Extend-C18 4.6 x 150 mm, 5 mm 流动相: 30% 缓冲液: 70% MeOH pH 7 缓冲液20 mM Na2HPO4 pH 11缓冲液 20 mM TEA 流速: 1.0 mL/min 温度: RT 检测器: UV 254 nm 0 5 1 2, 3 4 5 Time (min) 7 6 C18 pH 7 1. Maleate 马来酸盐 2. Scopolamine 东莨菪碱 pKa 7.6 3. PseudoEphedrine 假麻黄碱 pKa 9.8 4. Doxylamine 抗敏安(多西拉敏) pKa 9.2 5. Chlorpheniramine 氯苯吡胺pKa 9.1 6. Triprol内径ine 苯丙烯啶pKa 6.5 7. Diphenhydramine 苯海拉明 pKa 9.0 C18 pH 11 0 5 10 1 2 3 4 Time (min) 6 5 7 高pH下, 碱性成分的保留增加 待测物pKa+1.5 以外的流动相pH 可保证方法的 稳定性 键合相-适用pH范围 pH 1-8 1. 使用空间位阻大的硅烷 2. 未-封端 pH 2-9 1. 致密键合的二甲基烷基硅烷 2. 专利技术双 - 封端 pH 2-9 1. 极性烷基固定相 2. 使用空间位阻大的硅烷 3. 三封端 pH 2-11.5 1. 独特的双齿键合结构 2. 双封端 Si O Si O Silica Support C18 C18 Si O NH O Silica-based 色谱柱 Packing with Alkyl/am内径e Stationary Phase O R R Si OH Si O Si R R R O OH R CH CH CH CH C