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电泳 第八章 电泳 第一节 电泳的基本原理 第二节 电泳及其应用 第一节 电泳的基本原理 第一节 电泳的基本原理 电泳是指带电荷的粒子在直流电场中，向带符号相反的电极的移动，是一种电动现象。在离子移动的物理化学理论中，按照Debye-Hückel的理论，电泳决定于环绕每个离子的离子氛中的扩散双电层。当离子的尺寸越大，溶液的离子强度越高时，这种电泳现象就变得越明显。所以电泳现象中的表面电势和双电层等因素起着决定作用。而这些又与溶液性质及胶体的颗粒所带电荷有关。 第一节 电泳的基本原理 蛋白质或其他多电解质则由其本身所具有的功能团的解离而带电。蛋白质具有正负两类解离基，称为两性电解质。蛋白质在酸性介质中带正电，在碱性介质中则带负电。在某一pH值时，其正负电荷相等，此时的pH即称为该蛋白质的等电点。 2．电动现象 由于胶体粒子表面有偶电层、偶电层的固定层和可移动层之间形成电位，叫作电动电位或Zeta—电位(ξ电位)。电动电位的存在引起电动现象。 第一节 电泳的基本原理 二、影响电泳迁移速率的因素 推动粒子运动的力等于离子的净电荷与电场强度的乘积，即： （8-1） 式中 F——运动的力，牛顿； Q——离子的净电荷，库仑； E——电场强度，伏特/米。 第一节 电泳的基本原理 而粒子在运动时又受到—定的阻力，对于球形粒子来说，此阻力服从stoke定律。 (8-2) 式中 ——阻力，牛顿； ——粒子半径，米； ——介质粘度，牛顿·秒/米2； ——泳动速度，米/秒。 当粒了以稳态运动时，电动力与阻力相等，即： 。因此， (8-3) 第一节 电泳的基本原理 电泳迁移率是指在单位电场强度(1伏特/米)时的泳动速度，即： ，代入(8-3)式得 (8-4) 影响电泳迁移率的因素很多，可以分为以下三大类： (1)与被动离子(或粒子)本身的特性有关的因子，如电荷符号和大小、本身的大小和形状、水化程度、解离趋势、两性性质等。 第一节 电泳的基本原理 (2)环境因素，如缓冲液浓度、离子强度、介电性质、化学性质、pH、温度、粘度、有无极性分子存在(因为它可以影响粘度或介电性)等。在有支持物的情况下，影响因素更多，如支持物的吸附作用，不均一性、离子交换能力、电渗现象、虹吸作用、热和蒸发作用等。 (3)所加电场的特性，如强度和纯度(是否杂有交流电)。 这些因素在实验过程中要充分注意，尽量保持条件恒定不变，以便获得可重复的结果。 第二节 电泳及其应用 一、电泳的分类 1．按分离的原理区分 按分离的原理区分，电泳可分为区带电泳(zone EP. ZEP)、移界电泳、等速电泳和等电聚焦电泳。 (1)区带电泳 是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液，然后加电场，分子在支持介质上或支持介质中迁移。不同的离子成分在均一的缓冲液(或称载体电解质)系统中分离成独立的区带，可以用染色等方法显示出来，如果用光密度计扫描可得出—个个互相分离的峰，与洗脱色谱的图形相似，电泳的区带随时间延长和距离加大而扩散严重，影响分辨率。加不同的介质可以减少扩散，特别是在凝胶中进行，它兼具分子筛的作用，分辨率大大提高，是应用最广泛的电泳技术。 第二节 电泳及其应用 (2)移界电泳 电场是加在大分子溶液和缓冲溶液之间的一个非常窄的界面上，带电分子的移动速率通过观察界面的移动来测定。如果大分子的离子溶液是不均一的，就能观察到多个移动的液面。缓冲液的选择是很重要的，它必须与大分子的离子溶液形成鲜明的界面。这种电泳只能起到部分分离的作用，如将浓度对距离作图，则得出一个个台阶状的图形，和色谱法前向分析的图形相似，最前面的成分有部分是纯的，其他则互相重叠。各界面可用光学方法显示，这就是Tisclius最早建立的电泳方法。 (3)等速电泳 在电泳达成平衡后，各区带相随，分成清晰的界面，以等速移动。按浓度对距离作图也是台阶状，但不同于上述移界电泳，它的区带没有重叠，而是分别保持。 第二节 电泳及其应用 (4)等电聚焦电泳