海洋生物技术：海洋微生物的分离.docVIP

PAGE 课程名称 海洋生物技术 教学内容 （项目) 8 海洋微生物的分离培养 授课进度 第八次授课 教学日期 及课节 第八周 共（2）学时 教学地点 多媒体教室 教学目标 掌握海洋微生物的分离程序，熟悉微生物的培养技术，了解海洋微生物的培养新方法 教学重点 掌握海洋微生物的分离程序，熟悉微生物的培养技术，了解海洋微生物的培养新方法 教学难点 熟悉微生物的培养技术 学情 在蓝色经济与海洋+背景下，学生们对海洋生物技术很感兴趣。 教学设计 教学环节 时长 （分钟） 教学过程及内容设计 教学方法 学习任务一 海洋微生物的分离程序 30分钟 第八章 海洋微生物的分离培养 任务一、海洋微生物的分离（30分钟） 引入：发酵工程的工艺流程中，首要任务是菌种的分离与选育， 海洋微生物的分离获得是海洋微生物资源利用的前提。 微生物处于混杂的生长状态，必须分离、纯化。分离的方法有: 划线分离法、稀释分离法、 单孢子或单细胞分离法等。 微生物分离一般流程为 采样 富集培养 分离 筛选 毒性试验 1.平板划线分离法 用接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，划线适宜的话，微生物能分散，培养后，可在平板表面得到单菌落。 2.稀释倒平板法 将待分离材料用无菌水作梯度稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），分别与已溶并冷至 45 ℃的琼脂培养基混匀，倾入培养皿，凝固后保温培养一定时间即可出菌落。 若稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，挑取可得到纯培养。 3.单孢子或单细胞分离法 采取显微分离法直接分离单个细 胞或个体获得纯培养。或用特制的毛细管在载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，移到合适的培养基进行培养。 4.选择性培养基分离法 各种微生物对不同的化学试剂、染料、抗生素等具有 不同的抵抗能力，利用这些特性可配制合适某种微生物而限制其它微生物生长的选择培养基，以获得纯培养。 类型（1） 控制营养成分 如要分离淀粉酶产生菌，可用淀粉作唯一碳源，分离蛋白酶产生菌，可用酪素作氮源。（纤维素培养基——分离产纤维素酶的菌 ） （2） 控制培养基的酸碱度 细菌要求中性、放线菌要求偏碱、酵母和霉菌要求偏酸性生长。 （3） 添加抑制剂 如分离放线菌，可在培养基中加入几滴酚，可抑制霉菌和细菌的生长：分离真菌时，培养基中加入青霉素等抑制细菌生长的抗生素，可抑制细菌的生长。 （加抗生素——分离真菌 、加1%酚——分离放线菌 ） （4）热处理 如分离芽孢杆菌或耐热菌，可以把分离样品与60-70℃，甚至更高的温度处理，杀死其它营养细胞。 （5）控制培养温度 如分离嗜热微生物时，可把培养温度提高到50-60?℃，甚至更高。 （6）控制通气条件 分离厌氧菌，就必须在厌氧环境中培养，分离好氧菌，通气条件必须好。 提问法；讨论法 学习任务二 微生物的培养技术 30分钟 任务二、微生物的培养技术（约30分钟） （一）微生物的营养物质 1、碳源 2、氮源3、生长因子4、水 5、无机盐 思考讨论（10分钟） 如何利用选择培养基从混合微生物中分别分离出硝化细菌（硝化细菌能将有毒的氨转换为无毒性的硝酸盐，并可抑制病原菌生长，自养微生物）、圆褐固氮菌、金黄色葡萄球菌（嗜盐）、酵母菌？ 加入青霉素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基 ： 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基 ：分离自养型微生物 （二）微生物的代谢 微生物的代谢与其他生物相比,有什么不同？为什么？ 答：微生物的代谢异常旺盛，微生物的表面积与体积的比，约为同等重量成年人的三十万倍。 在适宜的条件下大肠杆菌每小时分解的糖是自身重量的两千倍；乳酸菌每小时产生的乳酸能达到自身重量的成千上万倍。 利：生产效率高，生产周期短 弊：有害微生物已给人类带来损失和灾害 研究步骤：人工培养—定期取样—测定生长 微生物群体数量的测定方法 测数目 测重量 例 待测样品1ml,稀释100倍后,取1ml稀释液与1ml含有红细胞1000个的液体混合均匀,显微镜下随机选若干个视野计数,得出细菌个数与红细胞个数比为5:1,则待测样品中含细菌多少个？5×105个 称干重：一般干重为湿重的10～20%。待测培养液放入离心管中，清水离心洗涤1～5次后，干燥处理，然后称干重。一个细胞（细菌）一般重约10－12～10－13g。 微生物生长曲线的实践意义 处于对数期的细菌，生长繁殖速率快，代谢旺盛 进入稳定期后，抗生素等代谢产物逐渐增多 生产上常用这个时期的细菌作为菌种，以缩短生产周期。 如果适当补充营养物