植物基因工程技术及应用.pptVIP

（5） 农杆菌介导 几乎所有的双子叶植物尤其是豆科类植物的根部常常会形成根瘤，这是由于植物根部被一种革兰氏阴性土壤杆菌农杆根瘤菌（A.tumefaciens）感染所致，其致瘤特性是由该菌细胞内的野生型质粒 Ti介导的。 第31页，共65页，编辑于2022年，星期一 二元整合转化程序 将外源基因克隆在大肠杆菌-农杆菌穿梭质粒的T-DNA区内； 重组质粒直接转化农杆菌株，该菌株携带只含vir区不含T-DNA区的Ti辅助质粒； 第32页，共65页，编辑于2022年，星期一 （2）农杆菌介导外源基因转移技术的一般操作 ①将表面消毒的叶片切成小块 ②小块在过夜培养并稀释到一定浓度的含外源基因的根癌农杆菌液中共培养几分钟，使让根癌农杆菌感染叶片切块的伤口。 ③从菌液中捞出小叶块，培养基中培养2天。 ④在含头孢霉素选择培养基中筛选转化细胞。继续培养，转化的细胞分化出芽。 ⑤将芽转入含有抗生素的生根培养基上，诱导生根。 ⑥将完整的转基因植株移栽到土壤中。 第33页，共65页，编辑于2022年，星期一 a b c d 第34页，共65页，编辑于2022年，星期一 分子鉴定 : PCR Southern blot Northern blot Western blot 蛋白质电泳 5. 转