植物组织培养技术流程.pptVIP

第1页，共14页，编辑于2022年，星期一 §1 实验室仪器设备 第2页，共14页，编辑于2022年，星期一 第3页，共14页，编辑于2022年，星期一 §2 实验基本操作 一、母液的配制 1.MS母液的配制 2.激素母液的配制 大量元素(20倍)、微量元素(1000倍)、铁盐(100倍)、有机元素(100倍) 6-BA、KT、ZT等浓度为0.5mg/ml； NAA浓度为0.1mg/ml 第4页，共14页，编辑于2022年，星期一 二、培养基的配制与灭菌 MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30 mg/L pH 6.0 1L 适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃ 维持20～30min注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能开盖。 1.培养基配制 2.培养基灭菌 第5页，共14页，编辑于2022年，星期一 三、外植体的消毒与无菌操作 消 毒 剂 使用浓度(%) 消毒时间(min.) 效 果 残液去除难易 乙醇 70-75 0.1-3 好 易 新洁尔灭 10～20 5～30 好 易 氯化汞 0.1～1 2～15 最好 最难 过氧化氢 10～12 5～15 较好 最易 抗菌素 4～50mgl-1 30～60 较好 较难 次氯酸钙/纳 9 ～ 10 5～30 好 易 1.外植体消毒 第6页，共14页，编辑于2022年，星期一 正 确 错 误 取流水冲洗（至少5min）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗3-4次，放入无菌培养皿中，用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。 第7页，共14页，编辑于2022年，星期一 1、用75%的酒精喷洒超净工作台。2、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪镊杀菌20min-30min。注意：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。3、关空间紫外灯，过5-10min进入缓冲间，以75%洗手和手臂，进入接种台。 4、关闭超净台紫外灯，打开照明灯。 5、试验操作。 6、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。 7、收拾无菌纸、材料瓶等。 。 2.无菌操作 第8页，共14页，编辑于2022年，星期一 注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（3）为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧。（4）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。 第9页，共14页，编辑于2022年，星期一 接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中 正 确 错 误 第10页，共14页，编辑于2022年，星期一 §3.植物组织培养流程 路 线 一 第11页，共14页，编辑于2022年，星期一 路 线 二 第12页，共14页，编辑于2022年，星期一 路 线 三 第13页，共14页，编辑于2022年，星期一 感谢大家观看 第14页，共14页，编辑于2022年，星期一 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *