免疫组化幻灯.pptVIP

免疫组化结果的判断原则 ?每批染色都要有特异性阳性对照和阴性对照为基础,才能对染色结果做判断。 ? 阳性表达必须在细胞和组织特定的抗原部位才能视为阳性。 ?阴性结果不能视为抗原不表达,即阴性结果无判断意义;阳性结果有强弱、多少之分, ?当免疫组化结果与HE切片诊断有矛盾时,以HE切片诊断为准。?应用“反证法, 确保免疫组化在诊断病理中的准确性。 ?避免假阴性和假阳性的发生。 第29页，共45页，编辑于2022年，星期二 免疫组织化学的应用 第30页，共45页，编辑于2022年，星期二 (一)提高病理诊断的准确性 病理诊断当属坚信不疑的，但在实际工作中要做到100%是不可能的。采用免疫组化检查后，部分疑难病例最后获得正确诊断。应用免疫组化方法，可以大大提高病理诊断的准确率，有利于疾病的临床诊治。 第31页，共45页，编辑于2022年，星期二 1、激素受体及生长因子的检测在预后及治疗方面的应用 激素受体和各种生长因子对正常组织的功能调节是必不可少的，同时也可影响着肿瘤的生物学行为。应用免疫组化方法，可对肿瘤内各种激素受体与生长因子进行定位、定量分析，这已广泛应用于肿瘤临床工作。 (二)在肿瘤病理学的研究和诊断中的应用 第32页，共45页，编辑于2022年，星期二 第1页，共45页，编辑于2022年，星期二 主要讲述的内容 概述 免疫组化的概念和优点。 免疫组化染色前的准备。 抗体的标记 如何降低非特异性染色。 免疫组织化学方法 免疫组化结果的判定以及染好切片的关键 免疫组织化学的应用。 免疫酶组织化学染色图片举例。 第2页，共45页，编辑于2022年，星期二 　　免疫组织化学又称免疫细胞化学，其主要原理是用 荧光素、生物素或地高辛等标记的抗体（或抗原）对细 胞或组织内的相应抗原（或抗体）进行定性、定位或定 量检测，经过组织化学的呈色反应之后，用显微镜、荧 光显微镜或电子显微镜观察。凡是能作抗原、半抗原的 物质，如蛋白质、多肽、核酸、酶、激素、磷脂、多糖、受体及病原体等都可应用相应的特异性抗体，将其用免疫细胞化学手段检出，并研究。 概念 第3页，共45页，编辑于2022年，星期二 　　1. 高度的特异性 　　抗原抗体反应是特异性最强的反应之一，免疫细 胞化学所用的抗体必须是特异性强的多价或单价抗体， 具有高度的认别能力，在抗原识别上可达到单个氨基 酸的水平，这是其它组织化学方法难以相比的。 免疫细胞化学的突出优点是： 第4页，共45页，编辑于2022年，星期二 　　2. 敏感性高 　　现代免疫细胞化学采用各种有效方法最大限度 保存细胞和组织内待检物质的抗原性，采用各种增 敏方法，使用高度敏感的和高亲和力的抗体，保证 可检出细胞内超微量的抗原分子，用显微镜和电子 显微镜观察结果，因此，它是在细胞、分子水平或 基因水平的检测技术。 第5页，共45页，编辑于2022年，星期二 　　3. 方法步骤统一 　　若掌握一种技术操作方法步骤，则一通百通。 　　4. 形态、机能和代谢密切结合 　　是一种集定性、定位和定量密切结合；形态、 机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。 第6页，共45页，编辑于2022年，星期二 抗原修复 常规石蜡切片的标本一般均采用甲醛固定，甲醛固定的部分组织细胞免疫组化的敏感性明显降低，主要原因为甲醛固定过程中形成的醛键以及甲醛固定导致的蛋白与蛋白之间的交联，均会封闭部分抗原决定簇，同时甲醛的这种交联作用会影响细胞膜的通透性，使抗体分子难于渗入细胞内，从而影响染色效果。 第7页，共45页，编辑于2022年，星期二 ?化学方法(酶消化方法) 胰蛋白酶(trypsin)消化方法 酶浓度一般为0.05%~0.1%, 胃蛋白酶(pepsin〉消化方法 0.4%胃蛋白酶 链霉蛋白酶(poruse)消化方法 浓度为0.1%。 第8页，共45页，编辑于2022年，星期二  ?物理方法 单纯加热方法; 高压加热方法; 微波方法 第9页，共45页，编辑于2022年，星期二 微波方法 将切片常规脱腊后水洗，放入盛有枸橼酸缓冲液的容器中，置微波炉加热沸腾，时间为5min×2次。 加热完毕，将切片缸在室温下放置，使缸内温度自然下降至40℃左右，蒸馏水洗，进入免疫组化染色。 第10页，共45页，编辑于2022年，星期二 抗体的标记 为了使抗原-抗体可见，必须将抗体标记，利用标记物与其他物质的反应将阳性结果放大，并转换成可见的荧光或呈现出颜色。 第11页，共45页，编辑于2022年，星期二 免疫组化染色中比较成熟的标记物有：异硫氰酸荧光素、辣根过氧化物酶、铁蛋白、胶体金、葡萄球菌A蛋白、生物素、放射形核素等。 由于标