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贴壁-悬浮培养 贴壁-悬浮培养，又称假悬浮培养，主要是为了结合悬浮培养和贴壁培养的优点而避免其不足。 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养 悬浮培养：操作简便，细胞密度低 贴壁培养：操作复杂，细胞密度高 贴壁-悬浮培养 贴壁-悬浮培养，又称假悬浮培养，主要是为了结合悬浮培养和贴壁培养的优点而避免其不足。 微载体培养 包埋（或微囊）培养 结团培养 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养 微载体培养 1967年，荷兰的van Wezel首先采用葡聚糖Sephadex A50微小颗粒培养贴壁细胞获得成功 1980S已被正式用于工业化生产各种疫苗和其他细胞产品，并出现了一大批商品化的微载体（microcarrier）。 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养 微载体培养 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养 微载体培养 1980S后期，又开发出多孔微载体（或称多孔微球），极大地增加了供细胞附着的比表面积，且适用于悬浮培养。 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养 微载体培养 加入钛等金属增加比重 ——适用于固定床反应器 不加钛比重轻 ——可用于通气搅拌罐式生物反应器、气升式生物反应器。 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养 微载体培养 理想的微载体： 1、表面性质与细胞有良好的相容性，适于细胞附着、伸展和增殖 2、材料无毒性，对细胞、人体 3、材料惰性，不与培养基成分发生化学变化，也不吸收营养成分 4、材料软性，避免在搅拌中损伤细胞 5、比重适中，在1.030-1.045g/ml，在低速搅拌下就可悬浮，而静止时又很快沉降，便于换液和收获 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养 微载体培养 理想的微载体： 6、粒径溶胀性均一， 在60-250?m之间，差异不大于20?m，有利于细胞均匀地分布在各微载体表面 7、具有良好的光学透明性，适于在倒置显微镜下观察细胞在载体上的生长情况 8、可耐120℃高温，便于采用高压蒸汽灭菌 9、经简单处理后可反复使用多次 10、原料充分，制作简便，廉价 悬浮培养 贴壁培养 贴壁-悬浮培养 生产用动物细胞的获得 原代细胞 二倍体细胞系 转化细胞系 原代细胞 直接取自动物组织、器官——制成细胞悬液 不能完全形成单细胞，且某一组织常由多种细胞组成 生产中需要大量的动物，费钱，费劳力 常用：鸡胚细胞、兔肾或鼠肾细胞、血液淋巴细胞 二倍体细胞系 从原代细胞纯化出一定的细胞株 具有明显的贴壁依赖和接触抑制的特性 有限的增殖能力，50代 无致瘤性 一般均从动物的胚胎组织中获得，如： WI-38、MRC-5、2BS MRC-5 转化细胞系 通过某个转化过程形成异倍体 转化：自发（多见于啮齿动物）、人工诱发（病毒或化学试剂）、利用肿瘤组织 特点：具有无限增殖的能力，倍增时间较短，对培养条件和生长因子等要求较低，更适合大规模工业化生产的需要 常见：Namalwa、CHO-K1、BHK-21、Vero CHO-K1 BHK-21 uninfected infected S2 动物细胞的培养技术 动物细胞的形态和生理特点 生产用动物细胞的获得 动物细胞的培养条件 动物细胞培养基 动物细胞大规模培养的方法 动物细胞的培养条件 1、器材的清洗和消毒 2、保证良好的水质 3、PH值 去除有害因子，防污染 经特殊处理 最适为7.2-7.4； 使用缓冲体系 动物细胞的培养条件 4、渗透压 5、温度 6、空气 最适290-300mOsm/kg；NaCl调节；平衡盐 最适37?0.5oC 足够的氧气； 常采用不同比例的O2、N2、CO2和空气 S2 动物细胞的培养技术 动物细胞的形态和生理特点 生产用动物细胞的获得 动物细胞的培养条件 动物细胞培养基 动物细胞大规模培养的方法 动物细胞培养基 天然培养基 合成培养基 无血清培养基 天然培养基 早期阶段：多采用天然培养基 常用：血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸液、羊水、腹水等 缺点： 1、培养基成分复杂，组分不稳定， 2、来源有限 ——因此不适合大量培养和生产的需要 合成培养基 1950年，Morgan等首先采用成分明确的化学试剂配制培养基，开创了合成培养基的研究使用阶段 优点：成分明确，组分稳定，可大量生产供应 组成：糖类、氨基酸、维生素、无机盐、核酸前体等 尚需添加成分：动物血清（如5-10%的小牛血清） 合成培养基 可能的机制： 1、提供有利于细胞生长所需的各种生长因子和激素 2、提供有利于细胞贴壁所需的贴附因子和延伸因子 3、提供可识别金属、激素、维生素和脂类的结合蛋白 4、提供细胞生长所必需的脂肪酸和微量元素 5、提供良好的缓冲体系 无血清培养基 无血清培养基：在合成培养基（未添加动物血清）