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基因工程概论 本章重点 1、基因工程原理和方法 2、基因工程工具酶 3、基因工程中的载体 4、基因工程技术应用 遗传工程 狭义的遗传工程: 基因工程 广义的遗传工程 指的是用遗传学手段来改造或重组生物的遗传特性的技术。 包括杂交、细胞工程、染色体工程、蛋白质工程和基因工程等。 基因工程主要程序 1、目的基因的制备 2、重组DNA分子的构建 3、重组DNA分子转移到受体细胞 4、转化子的筛选 5、目的基因的表达与功能的鉴定 核心技术：DNA重组技术 重组DNA技术 Recombinant DNA technology,1972年，Berg发明。 定义：指在体外将不同来源的DNA进行剪切和重组，形成嵌合DNA分子，通过载体系统，将之导入宿主细胞，使其扩增表达从而使宿主细胞获得新的遗传性状。 限制性内切酶分类 三类限制酶的主要特性 3、修饰酶 修饰酶 内切酶对自身的DNA也有可能的破坏。 修饰酶识别特定的序列并将其甲基化，保护不被限制性内切酶作用。 载体--分类 1、克隆载体：以繁殖DNA片段为目的的载体。 如pBR322及其衍生质粒。 2、穿梭载体：既能在真核细胞中复制又能在 原核细胞中复制的载体。 3、表达载体：用于使克隆的外源基因在宿主 细胞内表达的载体。 基因工程技术的应用 生物合成 药物研发 环境治理 农作物育种 生物合成 目的基因在细菌中的表达，产生人们需要的蛋白质。 生产奶酪的凝乳酶传统上来自哺乳小牛的胃，现在通过基因工程，用酵母生产凝乳酶。 4、限制性内切酶的分类及性质是什么？ 5、载体有哪些特征，可分为几类？各有什么用途？ 本章专业词汇 基因工程（Gene engineering） DNA重组技术（ Recombinant DNA technology） 药物研发 微生物生长迅速，容易控制，适于大规模工业化生产。将生物合成药物成分的基因导入微生物细胞内，不但能提高产量，还能降低生产成本。 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 　　胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量低、价格高。 将合成胰岛素基因导入大肠杆菌，每2000L培养液就能产生100g胰岛素！价格降低了30%-50%! 环境污染治理 通常一种假单孢杆菌只能分解石油中的一种烃类。基因工程的“超级细菌”能吞食和分解多种污染物质。 　　 环境治理 抗虫转基因植物 抗虫棉花--问题探讨： 苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抗虫棉。 普通棉花　　抗虫棉 想一想：完成抗虫棉的培育，需要哪些关键工作？ 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 提取 抗虫基因 通过运载体导入 转基因棉花含抗虫基因 转基因棉花有抗虫特性 苏云金芽孢杆菌 转基因棉花产生伴胞晶体 思考：在以上过程中关键步骤或难点是什么？ 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”——载体 转基因食品 安全吗?! 转基因植物的安全性争论 支持派认为：如果转基因技术得不到支持，将被扼杀，并且强调，迄今为止并没发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。 美、加、澳几千万人在吃转基因食品，超市有4000多种，到现在为止也没有—个案例说明有问题 。 反对派的观点 一英国科学家声称，转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能； 美国康乃尔大学也发现，转基因玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境。 环保团体认为未经长期安全测试，长期食用可能对人类及生态环境造成负面影响。 ⒈要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶 是( )　 ①限制酶　②连接酶　③解旋酶　④还原酶　　　 Ａ．①②　Ｂ．③④　Ｃ．①④　Ｄ．②③ 2.基因工程的正确操作步骤是（　 ）①使目的基因与运载体结合　　②将目的基因导入受体细胞　③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求④提取目的基因 Ａ． ③②④① 　　Ｂ． ②④①③　　　　　 Ｃ． ④①②③ 　 　Ｄ． ③④①② GAATTCCGTAGAATTCGGATT 3、尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端 CTTCATGAATTCCCTAA GAAG