嘌呤类药物作用及巯基嘌呤甲基转移酶遗传多态性的研究进展.pdfVIP

目前研究结果表明,治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)的抗嘌呤代谢药物——6- 巯基嘌呤(6-MP)和6-巯代鸟嘌呤(6-TG)均是无内在生物活性的药物,必须通过 体内一系列代谢后才能发挥抗白血病效应。而人体一种被称为巯基嘌呤甲基转 移酶(TPMT)的代谢酶在此类药物代谢和抗白血病作用中起关键作用。此酶是存 在于哺乳动物和禽类细胞中的一种细胞内酶,非金属依赖性,能利用S-腺苷-L- 甲硫氨酸(SAM)作为甲基的供体和底物结合,特异地催化杂环类和芳香类化合物 苯环 6-位硫原子的甲基化,其内在底物和主要的生物学功能仍然未完全清楚［1， 2］，而其DNA编码顺序上某个核苷酸碱基点突变,是造成嘌呤类药物不同强度 的细胞毒作用的基础［3］。所以,对于TPMT酶学特点、其遗传多态性的分子生 物学机制以及 6-MP、6-TG 临床关系的研究成为当前研究药代动力学的热点之一。 1 6-MP和6-TG的代谢［4，5］ 6-MP的代谢途径：①由次黄嘌呤磷酸核糖转 移酶(HPRT)催化先形成硫基次黄嘌呤单磷酸盐(TIMP),硫基黄嘌呤单磷酸盐 (TXMP),硫基鸟嘌呤单磷酸盐(TGMP),后者经磷酸化后分别形成二磷酸盐和三磷 酸盐。后三种物质统称为TGNs,它整合到肿瘤细胞中影响DNA的复制及RNA的 表达,发挥抗肿瘤作用。②6-MP,TIMP,TGMP均可由TPMT催化生成甲基化的衍生 物6-meMP,6-meTGMP,6-meTIMP,这些甲基化的化合物属于“无活性”的物质,它 们能够抑制磷酸核糖焦磷酸化氨基转移酶(PRPP-AT)的活性,后者是细胞重新合 成嘌呤步骤中的关键酶,因此,抑制PRPP-AT的活性就阻断了肿瘤细胞遗传信息 的表达,从而达到抗白血病的作用。③由黄嘌呤氧化酶催化形成6-硫基黄嘌呤 后再形成尿酸也可生成尿酸排出。 6-TG的代谢途径：①由HPRT催化直接形成硫基鸟嘌呤磷酸化合物(TGNs)发 挥抗白血病作用。②也可由TPMP催化生成甲基化的产物如6-meTG,或me-TGMP, 达到抗肿瘤的作用。但组织中 TPMP 对 6-TG 的催化效力远比 6-MP 低(约为 1/12) ［4］，故此过程并非6-TG的主要代谢途径。③6-TG由鸟嘌呤脱氢酶催化生成 6-硫基黄嘌呤再由黄嘌呤氧化酶催化生成尿酸排出。 2 TPMT的酶学特点 2.1 TPMT的组成结构：由两个具有相同的催化功能单体组成,说明TPMT的结 构并非引起遗传多态性的原因。TPMT的分子量大约为30000。通过提取和分析 人肾脏组织中的TPMT,发现它由245个氨基酸残基组成。另有人还发现几乎每 个依赖SAM的甲基转移酶均含有3个结构保守的序列(motifⅠ，Ⅱ，Ⅲ)，分别 含 24-，12-，12-三个单体结构,估计这些序列为酶结合底物的结构域［6～8］。 2.2 TPMT的组织分布：人类TPMT首先在肝脏、肾脏中被发现,随后陆续地在 胃肠道、肺、脑、血液、胎儿、胎盘等组织中发现。成年人肝细胞的TPMT浓度 和血液组织中几乎呈直线相关。第3个月的胎儿即有TPMT的存在,其中第6个 月的浓度及活性和新生儿类似,说明TPMT的浓度及活性在人体各组织内，甚至 肿瘤组织中均存在密切相关性,测定红细胞中的TPMT浓度即可大致估计其它组 织的酶活性［9,10］。 2.3 TPMT的酶学动力学特征：酶活性随孵育时间、底物浓度、pH值和离子浓 度、底物浓度(红细胞浓度)的变化而变化［11］。TPMT最佳孵育时间为60分 钟［10］,其它参数符合Michaelis-menten曲线。同时,Krynetski等［11］发 现在一般组织中(肝、肾等)酶作用最佳pH值为7.5,而血液中为6.7。 2.4 TPMT的底物及抑制物：Krynetski等做了18种6-MP和6-TG衍生物的酶 学实验,包括它们的核苷酸和核糖核酸,描述了它们的反应特性：大多数的衍生 物均可作为 TPMT 的底物,它们的酶促动力学特性均符合 Michaelis-menten 曲线, 发现6-MP比6-TG与酶结合的能力强。在所有前体药物(6-MP,6-TG)和衍生物 中,8-羟基-6-MP和6-TG分别是两个药物家系中活性最大者,而它们的核苷酸盐 类则是这些化合物中活性最低的,其原因可能是它们较易被水解。Mcleod等 ［10］发现当化合物中7,9位被烷基化后,其与酶结合的能力有所加强。同时发 现前体药物的Km、Vm和Km/Vm值均比其衍生物低,说明6- MP和6-TG并非 TPMT的自然底物。另外,6-硒基嘌呤