酶六章酶的固定化.pptVIP

此外还有脂质体包埋法，由表面活性剂和卵磷脂等形成液膜包埋酶，其特征是底物或产物的膜透过性不依赖于膜孔径大小，而只依赖于对膜成分的溶解度，因此可加快底物透过膜的速度。 第93页，共158页，编辑于2022年，星期三 各种固定化酶方法的优缺点比较 特性 物理吸附法 离子结合法 包埋法 共价结合法 交联法 制备 易 易 易 难 难 结合力 中 弱 强 强 强 酶活力 高 高 高 中 中 底物专一性 无变化 无变化 无变化 有变化 有变化 再生 可能 可能 不可能 不可能 不可能 固定化费用 低 低 中 中 高 第94页，共158页，编辑于2022年，星期三 —包埋、共价结合、共价交联三种虽结 合力强、但不能再生、回收；—吸附法制备简单，成本低，能回收再 生，但结合差，在受到离子强度、pH 变化影响后，酶会从载体上游离下来。 在使用价格较高的酶与载体时可行；—包埋法各方面较好，但不适于大分子底 物和产物。 没有一个方法是十全十美的，几种方法各有利弊 第95页，共158页，编辑于2022年，星期三 固定化酶的性质 第96页，共158页，编辑于2022年，星期三 固定化是一种化学修饰，酶本身的结构必然受到扰动，同时酶固定化后，其催化作用由均相移到异相，由此带来的扩散限制效应、空间障碍、载体性质造成的分配效应等因素必然对酶的性质产生影响。 第97页，共158页，编辑于2022年，星期三 1 影响固定化酶性能的因素—固定化酶制备物的性质取决于 所用的酶及载体材料的性质。—酶和载体之间相互作用使固定 化酶具备了化学、生物化学、 机械及动力学方面的性质。 第98页，共158页，编辑于2022年，星期三 成分 参数 酶 生物化学性质 分子量，辅基，蛋白质表面的功能基团，纯度（杂质的失活或保护作用） 动力学参数 专一性，pH及温度曲线，活性及抑制性的动力学参数，对pH，温度，溶剂， 去污剂及杂质的稳定性。 载体 化学特征 化学组成，功能基，膨胀行为，基质的可及体积，微孔大小及载体的化学稳定性 机械性质 颗粒直径，单颗粒压缩行为，流动抗性（固定床反应器），沉降速率（流体床） ，对搅拌罐的磨损。 固定化酶 固定化方法 所结合的蛋白，活性酶的产量，内在的动力学参数（即无质量转移效应的性质） 质量转移效应 分配效应（催化剂颗粒内外不同的溶质浓度），外部或内部（微孔）扩散效应； 这些给出了游离酶在合适反应条件下的效率。 稳定性 操作稳定性(表示为工作条件下的活性降低)，贮藏稳定性 效能 生产力（产品量/单位活性或酶量），酶的消耗（酶单位数/公斤产品） 固定化酶的特征参数 第99页，共158页，编辑于2022年，星期三 2 固定化后酶活性变化 固定化酶的活力在多数情况下比天然酶小，其专一性也能发生改变。 第100页，共158页，编辑于2022年，星期三 例如 用羧甲基纤维素作载体固定的胰蛋白酶，对高分子底物酪蛋白只显示原酶活力的30%，而对低分子底物苯酞精氨酸-对硝基酰替苯胺的活力保持80%。所以，一般认为高分子底物受到空间位阻的影响比低分子底物大。 第101页，共158页，编辑于2022年，星期三 在同一测定条件下，固定化酶的活力要低于等摩尔原酶的活力的原因可能是：①酶分子在固定化过程中，空间构象会有 所变化，甚至影响了活性中心的氨基酸②固定化后，酶分子空间自由度受到限制（空间位阻），会直接影响到活性中心对 底物的定位作用；③内扩散阻力使底物分子与活性中心的接 近受阻；④包埋时酶被高分子物质半透膜包围，大 分子底物不能过膜与酶接近。 第102页，共158页，编辑于2022年，星期三 值得注意的是——也有个别情况，酶在固定化后反 而比原酶活力提高。——原因可能是偶联过程中酶得到化 学修饰，或固定化过程提高了酶 的稳定性。 第103页，共158页，编辑于2022年，星期三 3 固定化对酶稳定性的影响 稳定性是关系到固定化酶能否实际应用的大问题 第104页，共158页，编辑于2022年，星期三 酶的稳定性包括 ——热稳定性 ——对各种有机试剂稳定性 ——对酶抑制剂的稳定性  ——对不同pH（酸度）稳定性 ——对蛋白酶稳定性 ——贮存稳定性 ——操作稳定性 第105页，共158页，编辑于2022年，星期三 在大多数情况下酶经过固定化后其稳定性都有所增加，这是十分有利的。 第106页，共158页，编辑于2022年，星期三 Merlose曾选择50种固定化酶，就其稳定性与固定化前的酶进行比较，发现其中有30种酶经固定化后稳定性提高，12