免疫微生物实验课件沉淀反应.pptxVIP

医学微生物学与免疫学实验室规则;实验成绩组成;沉 淀 反 应 ; 沉淀反应 Ag + Ab 可溶性抗原 （如血清、毒素等）;分类;一、双向免疫琼脂扩散 实验原理：可溶性抗原与相应抗体在半固体 琼脂内进行扩散，当两者比例合适时， 就出现白色沉淀线（阳性反应）。 沉淀线的形态、清晰度及位置反映抗原或抗 体的特异性和浓度等。利用已知抗原或抗体 检测未知抗体或抗原。; 实验目的： ;一、双向免疫琼脂扩散 材料： 1％盐水琼脂， 诊断血清（AFP Ab）, 阳性血清（含AFP Ag）， 生理盐水（NS）， 待检血清甲、乙。 载玻片，打孔器，湿盒，微量加样器，吸头。;一、双向免疫琼脂扩散 实验方法： 1、融化1％盐水琼脂； 2、制备半固体琼脂凝胶板：4 ~ 4.5ml/片 3、打孔：梅花孔 4、加样（每孔约10μl）； 5、标记，放湿盒，37℃温箱24h后观察结果。;;实验结果分析;一、双向免疫琼脂扩散 结果判读： 阳性血清与诊断血清间形成沉淀线 生理盐水与诊断血清（抗体）之间无沉淀线 待检血清、阳性血清与诊断血清间形成沉淀线且融合，说明待检血清和阳性血清抗原相同。; 二、对流免疫电泳 【实验原理】 蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。抗体属球蛋白，在碱性缓冲液只带微弱的负电荷，而且相对分子质量较大，电泳力较小，在琼脂电渗力作用下反而由正极向负极移动。 这样就使抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线。 ;对流免疫电泳实验原理;【实验材料】 1．电泳缓冲液：pH 8.6巴比妥缓冲液。 2．抗体：诊断血清（AFP抗体）。 3．抗原：阳性血清、待检血清甲乙。 4．1％盐水琼脂。 5．电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、移液器、移液头。 ; 【实验方法】 1．制板 2．打孔：双排孔 3．加样 4．电泳 将加好样品的琼脂板置电泳槽上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。搭好桥后，接通电源，控制电压6～10 V/cm板长，电泳约30～60 min。 5．关闭电源，取出琼脂板，观察结果。 ;正极;; 电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动称为电渗。液体移动的方向取决于固体带的是正电荷或负电荷。 ;;