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- 2022-05-06 发布于北京
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赢润生物
曾 林;;主要内容;核酸简介;核酸简介;核酸简介——质粒DNA;;基因组DNA提取方法;基因组DNA提取——CTAB法;基因组DNA提取——CTAB法;基因组DNA提取——CTAB法; CTAB法实验流程; SDS法原理
SDS是一种阴离子去垢剂,在高温(55~65℃)条件下能裂解细胞,使染色体离析,蛋白变性,释放出核酸;
提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度(冰浴),使蛋白质及多糖杂质沉淀,离心后除去沉淀;
上清液中的DNA用酚/氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
; SDS提取缓冲液的配方
;基因组DNA提取——SDS法;基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳检测;基因组DNA提取常见问题;基因组DNA提取常见问题分析;基因组DNA提取常见问题分析; DNA提取量少
实验材料不佳或量少
—— 选取新鲜(幼嫩)材料
破壁或裂解不充分
——充分研磨、破壁酶、延长裂解时间
沉淀不完全
——低温、延长沉淀时间
洗涤使得丢失DNA
;;质粒DNA提取;质粒DNA提取——碱裂解法原理;离心柱型质粒DNA提取试剂盒工作原理;质粒DNA提取及检测——实验准备;质粒DNA提取——碱裂解法;质粒DNA提取——实验流程;质粒DNA提取——电泳检测;质粒DNA提取常见问题;质粒DNA提取常见问题分析;质粒DNA提取常见问题分析
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