抗体的纯化:盐析法(salting out method).docxVIP

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  • 2022-05-10 发布于上海
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抗体的纯化:盐析法(salting out method).docx

抗体的纯化:盐析法(salting out method) 精制抗体的方法很多。一般采用综合技术,避免蛋白变性。如分离IgG时,多结合使用盐析法与离子交换法,以求纯化。提取IgM的方法也很多,如应用凝胶过滤与制备电泳法,或离子交换与凝胶过滤等。 ? 一、原理 ? 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 ? 1、试剂 ? (1)正常人混合血清;灭菌生理盐水。 ? (2)饱和硫酸铵溶液的配制 ? 称(NH4)2SO4(AR)400~425克,以50~80℃之蒸馏水500ml溶解,搅拌20分钟,趁热过滤。冷却后以浓氨水(15N NH4OH)调PH至7.4。配制好的饱和硫酸铵,瓶底应有结晶析出。 ? (3)萘氏试剂配制 ? 称HgI 11.5克,KI8克,加蒸馏水至50ml,搅拌溶解后,再加入20%NaOH 50ml。 ? (4)0.02M,PH7.4磷酸盐缓冲盐液(Phosphate Buffered Saline PBS)配制: ? 贮存液 ? A液:0.2M Na2HPO4:Na2HPO4·

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