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y h p a r g o t a m o r h C n i s t s i l a i c e p S r u o Y 用于大分子分离和纯化的HPLC和制备柱和介质 Bull. HPLC004EN - 06-2018 大分子的分析与纯化 - 介绍 反相高效液相色谱法分析和纯化多肽和蛋白质 RP-HPLC）反相模式的高效液相色谱是生物分子分析和纯化的首选。 它是分析和纯化蛋白质和多肽的最受欢迎的选择的关键原因是分 （ 辨率。 RP-HPLC能够分离几乎相同序列的多肽，两种小肽都是更大的蛋白质。 具有单个氨基酸残基差异的多肽通常可通过RP-HPLC分离。 制备 型RP-HPLC通常用于从毫克到数克量的肽的纯化。 RP-HPLC柱与多肽相互作用的机制 小分子的分离涉及分子在流动相和疏水固定相之间的 连续分配。 由于多肽太大，在色谱图运行期间，它们 多肽进入流动相 有机改性剂浓度达到临界值 多肽从RP表面解吸 吸附到疏水表面并保持吸附，直到有机钼浓度的变化 导致它们解吸。然后，当从柱中洗脱时，它们仅与表 面轻微相互作用。 多肽只有一小部分分子与RP表面 接触，俗称“疏水足”; 大部分分子暴露于流动相。 RP- 多 肽 吸 附 在 RP 表 面 上 HPLC基于被分离多肽的“疏水足” 中的细微差异来分 离多肽。 RP 表面 二氧化硅表面 多肽与疏水相之间相互作用的吸附/解吸机制的重要方面。 解吸多肽所需的有机改性剂的量非常精确，因此解吸发生在非常窄的有机改 性剂浓度范围内。 多肽解吸对非常精确的有机改性剂浓度的敏感性解释了RP-HPLC对这些分子的分析的选择性。当达到临界有机物浓度 时，尖峰是多肽突然解吸的结果。当多肽在柱上时，吸附/解吸机制仅发生一次。 解吸后，多肽与反相表面之间的相互作用非常小，对分 离几乎没有影响。梯度洗脱通常优选用于RP-HPLC多肽分离，但是它应该是非常吞咽和精确的。 肽和蛋白质分离中的RP-HPLC柱 二氧化硅基础HPLC介质的交互表面位于其孔隙内。多肽 必须进入孔中才能被吸附然后解吸。我们的超高纯度球形 二氧化硅具有三种不同的孔隙率，可根据目标分子的大小 充分利用其可能性。 100Å孔径是分析和纯化分子量至5000道尔顿的小肽的理想 选择。对于分子量范围为5000-10000道尔顿的较大肽，我们 的200Å孔径二氧化硅是最合适的。 300Å是分子量 10000道 尔顿，高达100K道尔顿的多肽和蛋白质的分析和纯化的最 佳指示。 粒度取决于您挑战的应用。 3-5μm用于分析方法（高达 4.6mmID），而5-10μm用于制备实验室规模应用（高达 21.2mmID）。如果您需要工艺规模纯化，粒径的选择应该 是更大的粒径（15μm或）。 Pag. 2 info@ 大分子的分析与纯化 - 介绍 反相固定相 通过将烃链键合到二氧化硅基础材料上来制造反相HPLC吸附剂。 形成填料的烃基是十八（C18），八（C8）或四（C4）碳的直链脂族 烃并确定该相的疏水性。 一些指南提供了哪些包装对肽和蛋白质分离最有效的信息。二氧化硅 C18色谱柱通常建议用于MW 5000道尔顿的肽和小蛋白质。 对于MW范围在5000-100