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UHPLCMSMS法测定雷公藤甲素人血浆蛋白结合率 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：UHPLCMSMS法测定雷公藤甲素人血浆蛋白结合率 1 1 仪器与材料 2 2 方法 2 3 结果 4 4 讨论 7 文2：反相高效液相色谱法测定人血浆中甲氧氯普胺 7 1 材料与方法 8 2 实验结果 9 3 临床应用 10 4 讨论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 UHPLCMSMS法测定雷公藤甲素人血浆蛋白结合率 文1：UHPLCMSMS法测定雷公藤甲素人血浆蛋白结合率 雷公藤甲素（Triptolide）为卫矛科木质藤本植物雷公藤（Tripterygium wilfordii）中分离得到的环氧化二萜内酯类成分，是雷公藤中的活性成分之一[1-3]。现代药理学研究表明，雷公藤甲素具有一系列药理活性，如抗炎、抗肿瘤、免疫抑制等药理作用[4-7]，其中其显著的抗肿瘤活性越来越得到临床的认可，是潜在的抗肿瘤候选药物。但是，雷公藤甲素治疗窗十分小，同时，在临床治疗中常常出现多种不良反应。另外，有研究表明，雷公藤甲素不仅是雷公藤制剂的有效成分而且也是有毒成分[8-10] 药物血浆蛋白结合率是药动学主要参数之一，和药物的疗效有重要的关系。通过查阅相关文献，未见雷公藤甲素有关血浆蛋白结合率的报道。本试验采用平衡透析法研究雷公藤甲素在人血浆蛋白中的结合率，并建立UHPLC-MS/MS法测定雷公藤甲素在人血浆中的浓度，为进一步开展药代动力学研究提供借鉴。 1 仪器与材料 Agilent G6430 LC-MS/MS液质联用仪（美国Agilent公司，所配高效液相仪为Agilent 1290）；MassHunter数据处理系统（veion ）；CentriVap离心浓缩仪（美国照生公司）；WH-2微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）；十万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）；Maxima 超纯水机（美国基因公司）；Biofuge PrimoR冷冻高速离心机（德国Heraeus公司）；透析袋（美国联合碳化公司，14000 D，压平宽度25 mm）；病毒灭活冰冻人血浆（江苏省血液中心） 对照品雷公藤甲素（批号111567-201404，中国食品药品检定研究院）、泼尼松龙（批号100153-201405，中国食品药品检定研究院）；实验用水为哇哈哈纯净水。 2 方法 色谱质谱条件 Phenomenex Gemini C18色谱柱（3 μm，100 mm× mm）；流动相：甲醇-%冰醋酸水溶液（含2 mmol/L醋酸铵）=75∶25；流速：200 μL/min；柱温：35℃；进样体积：2 μL。离子源：电喷雾电离源（ESI）；正离子方式检测；定量模式：多反应监测（MRM）；干燥气温度：400℃；毛细管电压：4000 V；雷公藤甲素的裂解电压（Fragmentor）及碰撞电压（CE）值分别为90、5 V；泼尼松龙（内标）的Fragmentor及CE值分别为100、20 V。检测对象：雷公藤甲素m/z - m/z ；内标m/z - m/z 。 溶液的配制 空白PBS溶液制备 精密称定 g KH2PO4、 g K2HPO4·3H2O、 g KCl，置于1 L容量瓶中，超纯水稀释并定容至1 L，得pH=的PBS溶液[11-12] 制备对照品储备液 精密称定雷公藤甲素 mg，置于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，超声10 min，摇匀，即得浓度为1012 μg/mL雷公藤甲素储备液；精密称定泼尼松龙 mg，置于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，超声10 min，摇匀，即得浓度为1004 μg/mL内标储备液。 制备透析外液 分别精密称定雷公藤甲素8、4、2 mg，加入适量PBS溶液溶于1 L容量瓶，超声30 min，PBS溶液定容至刻度，摇匀，分别取上述溶液适量，用PBS溶液稀释10倍，即得浓度为、、 μg/mL的透析外液。 样品处理 透析内液（血浆） 吸取100 μL透析内液样品，加入浓度为1 μg/mL内标泼尼松龙10 μL，震荡30 s，加入萃取溶剂乙酸乙酯 mL，震荡5 min，12000 min离心5 min，移出上清液。30℃下氮气吹干，100 μL 75%甲醇复溶，震荡5 min，12 000 min离心5 min，2 μL上清液进行LC-MS分析。 透析外液（PBS） 吸取透析外液100 μL，按“”项下操作流程处理。 平衡透析试验 透析袋预处理后备用，将其中一端扎紧，并加入1 mL空白人血浆，扎紧透析袋的另一端，同时袋内保留部分空气，将扎好的透析袋置于装有30 mL含雷公藤甲素PB