一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒及其制备方法发明专利.docx

一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒及其制备方法 技术领域 本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种新型冠状病毒 COVID-19抗原荧光检测试剂盒及其制备方法。 背景技术 2019新型冠状病毒COVID-19属于正冠状病毒亚科 (OrthocoronS1virinS1e)。从发现病毒性肺炎是由该病毒引起的数十 日内，由于人口流动性的原因，全国范围内相继出现确诊病例。该病 毒的潜伏期长达14天，在无症状的情况下也可传染。国家卫生健康 委员会决定将新型冠状病毒感染的肺炎纳入法定传染病乙类管理，采 取甲类传染病的预防、控制措施。 目前市场上暂无2019新型冠状病毒COVID-19抗原检测产品， 因此，亟需一种快速、特异、精准检测的新型冠状病毒COVID-19病 毒抗原荧光检测试剂盒。 发明内容 针对现有技术存在的不足，本发明的第一目的在于提供一种新型 冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，该试剂盒可快速、特异、 精准的检测出新型冠状病毒COVID-19 Spike蛋白的含量，具有灵敏、 准确、稳定的优点，可以对待测样品实现快速、超敏、准确的现场检 测，并且提供定量的检测结果。 为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案： 一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测免疫层析试剂盒，该 试剂盒包括底板，所述底板上铺设有样品垫、结合垫、包被膜和吸水 纸，所述样品垫和吸水纸分别位于底板的两端，所述样品垫搭接于结 合垫，所述结合垫搭接于包被膜，所述吸水纸搭接于包被膜；样品垫 优选为玻璃纤维材料，经Tris盐溶液浸泡处理后热烘干处理后裁切制 成，包被膜优选为硝酸纤维素膜。 所述结合垫上含有荧光微球标记的新型冠状病毒COVID-19 Spike蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡抗体；所述包被膜包 含检测区包被T和质控区包被C，所述检测区包被T有与结合垫上的 新型冠状病毒COVID-19 Spike蛋白单克隆抗体不同表位的新型冠状 病毒COVID-19 Spike蛋白单克隆抗体，所述质控区包被C有鸡IgY 抗体。 本发明进一步设置为：所述结合垫上的新型冠状病毒COVID-19 Spike蛋白单克隆抗体浓度为0.5～2.5mg/mL，所述羊抗鸡抗体浓度 为0.5-2.0mg/mL，所述结合垫上的新型冠状病毒COVID-19 Spike蛋 白单克隆抗体固化后的含量为0.8～1.5μg/cm?2，所述结合垫上的羊抗 鸡抗体固化后的含量为0.8～1.0μg/cm?2。 本发明进一步设置为：所述结合垫通过结合垫处理液处理；所述 结合垫处理液包括以下原料：5％～10％甜菜碱，3％～5％酪蛋白，5％～10％吐温-100溶解于0.01M及pH值为6.2～7.2的磷酸盐缓冲盐 溶液。 本发明进一步设置为：所述样品垫含有浓度为0.5～2.0mg/ml的 鼠IgG抗体。 本发明进一步设置为：所述检测区包被T上的新型冠状病毒 COVID-19 Spike蛋白单克隆抗体的浓度为0.5-2.5mg/ml，用量为 26μl/27-29cm。 本发明进一步设置为：所述鸡IgY抗体浓度为0.5-2.0mg/ml、 用量为26μl/27-29cm。 本发明进一步设置为：所述荧光微球的粒径为0.1～0.5μm，所述 荧光微球的激发光和发射光波长为400～750nm。 本发明还提供了一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试 剂盒的制备方法，包括以下步骤： S1、荧光微球的清洗与活化：将荧光微球悬液离心处理后，加入 吗啉乙磺酸溶液进行超声处理，接着依次加入碳二亚胺和N-羟基硫 代琥珀酰亚胺溶液，室温混匀后离心处理，弃上清液，再用吗啉乙磺 酸溶液重悬，重复清洗后超声混匀备用； S2、荧光微球标记抗体的制备：在步骤S1活化后得到的荧光微 球悬液中，分别逐滴加入新型冠状病毒COVID-19 Spike蛋白单克隆 抗体和羊抗鸡抗体，混匀后室温反应，离心清洗，沉淀用含有5％牛 血清白蛋白的磷酸缓冲盐溶液重悬后室温反应，离心清洗，沉淀再用 含1％牛血清白蛋白的TBST缓冲液超声重悬，得到荧光微球标记的 新型冠状病毒COVID-19 Spike蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的羊 抗鸡抗体； S3、结合垫的制备：将制作样品垫的材料裁切成条状，将步骤 S2得到的两种荧光微球标记抗体和含有5％～10％甜菜碱，3％～5％ 酪蛋白，5％～10％吐温-100溶解于0.01M及pH值为6.2～7.2的磷酸 盐缓冲盐溶液的结合垫处理液稀释，喷涂在结合垫上，烘干备用； S4、包被膜的制备：分别将另一种新型冠状病毒COVID-19 Spike 蛋白单克隆抗体和鸡IgY抗体用磷酸缓冲盐溶液调节浓度，然后将二 者分别在检测区包被T和质控区包被C划膜，烘干备用； S5、样品垫的制备：将制作样品垫的材料裁