红麴健康食品规格标准.pptVIP

３、動物活體基因毒性分析 一般使用囓齒類動物造血細胞的染色體傷害分析法 (In vivo test for chromosomal damage using rodent hematopoietic cells)。 第30页，共60页，编辑于2022年，星期二 (1)動物 一般使用雄性鼷鼠。若雄性與雌性動物在代謝或毒性上有明顯的差異時，則須同時使用雄、雌動物進行試驗。若試驗物質為特別針對某種性別時，則應使用該性別動物進行試驗。 第31页，共60页，编辑于2022年，星期二 動物數量 (2)動物數量 每組至少五隻動物。 (3)試驗物質給予途徑 以腹腔注射或強迫餵食給予。 (4)劑量範圍 測試三個以上劑量組。 第32页，共60页，编辑于2022年，星期二 最高容許劑量 若試驗需要，可由短期試驗之單一 (或重覆) 劑量投予試驗物質決定最高容許劑量，最高容許劑量即該劑量可引發骨髓毒性或其他明顯之毒性症狀 如抑制體重增加等，一般以最高容許劑量作為最高劑量。 第33页，共60页，编辑于2022年，星期二 致突變物質 (5)對照組 一般以試驗物質使用之溶劑作為陰性對照組，陽性對照組則給予會引發致突變物質。 (6)試驗物質給予頻率 單一或重覆劑量均可。 第34页，共60页，编辑于2022年，星期二 (7)測試方法 囓齒類骨髓細胞染色體異常測試法 (Chromosomal aberrations in bone marrow cells of rodents) 囓齒類骨髓細胞之微核測試法 (Micronuclei in bone marrow cells of rodents) 囓齒類周邊血液之微核測試法 (Micronuclei in peripheral blood of rodents) 第35页，共60页，编辑于2022年，星期二 (8)實驗步驟 囓齒類骨髓細胞之染色體異常測試法 i.經試驗物質處理的動物在適當時間犧牲，製備染色體玻片。由於試驗物質可能會造成細胞週期延長，故須在一個適當間隔製備檢品。 第36页，共60页，编辑于2022年，星期二 染色體結構變異 ii.每個劑量組製備兩片，每片至少觀察100個分裂中期細胞，檢查染色體結構變異與多套染色體的數目。 在描述細胞形態異常時，須註明染色體或染色分體的結構變異種類。 第37页，共60页，编辑于2022年，星期二 囓齒類骨髓細胞或周邊血液之微核測試法 i. 經試驗物質處理的動物在適當時間犧牲，並製備骨髓或血液抹片。一般動物經試驗物質處理後一段時間 (18到30小時) 即犧牲並收集檢品，或在24到72小時內進行多次採樣製作樣本。若試驗需要，可經由短期預備試驗結果，選擇反應最明顯的時間採樣。 第38页，共60页，编辑于2022年，星期二 網狀紅血球的產生 ii.每隻動物至少觀察1000個多染性紅血球 (polychromatic erythrocytes)或網狀紅血球 (reticulocytes)，記錄微核發生的數目，同時計算多染性紅血球或網狀紅血球佔全部紅血球的比例。 可採用Giemsa 或Acridine orange 螢光染劑之染色方法。可以觀察網狀紅血球的產生取代多染性紅血球。 第39页，共60页，编辑于2022年，星期二 (9) 試驗結果 囓齒類骨髓細胞之染色體異常測試法 以表格方式描述染色體變異的細胞總數，或每個細胞變異的頻率。 囓齒類骨髓細胞或周邊血液之微核測試法 以表格記錄多染性紅血球或網狀紅血球中微核發生的數目，及多染性紅血球或網狀紅血球佔全部紅血球的比例。 第40页，共60页，编辑于2022年，星期二 1. 基因毒性測試方法有： (1) 以基因突變為參考指標的測試方法 Gene mutation test with bacteria Gene mutation test with mammalian cells in culture Test with Drosophila melanogaster Spot test with mice Specific locus test with mice 第41页，共60页，编辑于2022年，星期二 (2) 以染色體變異做為參考指標的測試方法 Chromosomal aberration test with mammalian cells in culture Chromosomal aberration test with bone marrow cells of rodents Micronucleus test with rodents Chromosomal aberration test with genocytes of rodents Dominant lethal test with