海洋微藻培养液中二甲基硫与二甲基硫丙酸的同步分析.docVIP

海洋微藻培养液中二甲基硫与二甲基硫丙酸的同步分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：海洋微藻培养液中二甲基硫与二甲基硫丙酸的同步分析 1 1 引 言 1 2 实验部分 2 3 结果与讨论 4 文2：如何进行大气二甲基硫在线监测 9 1在线监测思路 9 2采样系统 9 3分析系统 11 4结论 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 海洋微藻培养液中二甲基硫与二甲基硫丙酸的同步分析 文1：海洋微藻培养液中二甲基硫与二甲基硫丙酸的同步分析 1 引 言 二甲基硫(DMS)是海洋中最丰富的挥发性硫化物[1，2]， 可以通过海气交换进入大气，从而影响局部甚至整个海域的气候以及形成酸雨、酸雾等[3，4]。它主要来自海洋微藻，其前体物质是二甲基硫丙酸(DMSP)，海洋微藻产生DMSP的能力因其种类和所处的海域而不同[4～6]。海洋微藻培养液中DMSP和DMS变化的研究，对改善海洋环境特别是海洋大气环境具有重要意义。 利用液相色谱质谱联用技术(LCMS)可以直接定量水体和细胞中的DMSP[7]，但预衍生过程繁琐，而且水体中DMS不能用液相色谱法测定。较简便的方法仍然是通过碱处理将DMSP转化为DMS后，气相色谱质谱联用(GCMS)法测定转化前后DMS的含量[4～6，8]。水体和藻体细胞中对DMS和DMSP的影响因素非常多，要准确定量分析培养液及其微藻中DMS和DMSP细微变化必须考虑这些因素。因此，与研究纯水体不同，微藻培养液中DMS和DMSP的同期检出方法很关键。本研究进一步优化了水体中DMS的固相微萃取(SPME)气相色谱质谱联用分析技术，建立了海洋微藻培养液中DMS与DMSP的测定方法，为海洋环境中生物硫循环的研究提供了一种新的分析方法。 2 实验部分 仪器与试剂 QP2010气相色谱质谱分析仪(日本SHIMADZU公司);VOCOL色谱柱(60 m× mm， μm)、固相微萃取系统和75 μm CarboxePolydimethylsiloxan(CAPDMS)萃取纤维(美国Supelco公司); CASYTT颗粒粒度计数分析仪(德国Casy公司)。二甲基硫(DMS，纯度≥95%)与丙烯酸(纯度≥99%)购于美国SigmaAldrich公司;甲醇(色谱纯，美国Tedia公司);二甲基硫丙酸(DMSP，本实验室合成)。其它试剂均为国产分析纯。 实验方法 标准溶液的配制 将DMS溶液加入甲醇溶液中，配成 g/L储备液，-20 ℃避光保存。绘制工作曲线时再取适量的母液加入到刚煮沸冷却后的海水溶液中，配成5 mL一定浓度的标准液。 DMSP合成 参考文献[9]，将 mL( mmol)丙烯酸和 mL(34 mmol) DMS 溶解在15 mL二氯甲烷中，室温下不断通入过量HCl气体，生成的沉淀过滤后再在甲醇乙醚 (1∶1，V/V)溶液中重结晶。通过核磁共振波谱仪检测，纯度95% 微藻培养 微藻藻种由宁波大学海洋生物实验室藻种室提供，培养海水(盐度25‰)经 μm醋酸纤维滤膜过滤后煮沸冷却，培养液采用浙江水产学院三号液配方(NMB3#)。藻种在2500 mL锥形瓶中于日光灯光照下培养，光照强度45～55 μmol/(m2·s)，光暗周期12∶12，培养温度为(20±2)℃，每天用颗粒粒度计数分析仪测量藻类密度，藻类生长平台期采集样品。每个样品平行培养3瓶，每瓶样品平行测定3次，取均值。 样品前处理及定量分析 取2份 mL藻液，以8000 min高速离心后，立即各取出 mL上清液。向15 mL预先放有搅拌磁子的顶空瓶中，加入其中一份样品的上清培养液，用 mL刚煮沸冷却后的海水稀释样品，加入 g固体NaCl(预先在120 ℃下烘干6 h)，立即进行固相微萃取;再向两只同样的顶空进样瓶中分别加入另一份样品的上清培养液 mL和下层含有藻体的 mL培养液，同样加入4 mL刚煮沸冷却后的海水稀释样品，加入 mL 10 mol/L NaOH溶液，4 ℃下放置过夜(12 h以上)后分别进行固相微萃取。 固相萃取纤维预先在250 ℃下活化30 min以上，顶空瓶放置于30 ℃恒温水浴电磁搅拌机中，磁力搅拌下，用SPME装置的针头刺穿瓶盖内聚四氟乙烯密封垫，推出萃取头暴露于顶空中，固定深度3 cm，萃取30 min，停止搅拌，25 ℃下再平衡吸附15 min，随即拔出进行GCMS分析。 根据样品中所含DMS特征离子信号(m/z 62)响应强度，用外标法求出各样品中DMS含量。立即测定的上清液样品中DMS的含量，即为此培养条件下 mL培养液中DMS的含量;加NaOH过夜的上清液样品中