高效毛细管电泳测定鸡蛋中三聚氰胺.docVIP

高效毛细管电泳测定鸡蛋中三聚氰胺 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：高效毛细管电泳测定鸡蛋中三聚氰胺 1 1 引 言 1 2 实验部分 2 3 结果与讨论 3 三聚氰胺在鸡蛋中的分布 5 文2：反相高效液相色谱法对畜产品中三聚氰胺残留的检测 6 1材料与方法 6 2结果与分析 7 3结论 8 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 9 文章致谢（模板） 9 正文 高效毛细管电泳测定鸡蛋中三聚氰胺 文1：高效毛细管电泳测定鸡蛋中三聚氰胺 1 引 言 从2007年美国首发的“宠物毒粮”风波，到2008年的“三鹿奶粉”事件，三聚氰胺已经引起了广泛关注。三聚氰胺，又称氰尿酰胺(在高温下可能分解为氰化物)，是生产塑料树脂的原料，分子中含有大量氮元素，不法分子为片面追求个人利益而将这种与食品毫不相干的工业原料引入食品中，对人们的健康造成严重威胁[1]。鸡蛋是日常食用最多的食品之一，为保障鸡蛋的食用安全，农业部最新颁布的鸡蛋中三聚氰胺的限量值为 mg/kg。建立鸡蛋中三聚氰胺残留的检测方法是十分必要。 目前，检测三聚氰胺的方法主要有液相色谱法[2～5]、液相色谱质谱联用法[6～8]和气相色谱质谱联用法[9，10]，其检测样品多为饲料，鸡蛋中三聚氰胺的检测方法的报道较少。杨水平等[11]报道了鸡蛋中三聚氰胺的表面解吸常压化学电离串联质谱法成像。毛细管电泳是近十几年发展起来的分离技术，具有高效快速、灵敏度高、自动化高、经济环保等优点，已成为生物化学和分析化学领域中发展最快的一种分离分析技术。本研究建立了鸡蛋中三聚氰胺的毛细管电泳检测方法，操作简便、分析快速、稳定可靠且经济环保，可作为鸡蛋样品中三聚氰胺测定的初筛方法。如果与质谱或电化学检测器联用，可以获得更高的灵敏度。 2 实验部分 仪器与试剂 HP3D高效毛细管电泳仪(德国Agilent公司)配二极管阵列检测器;拓展光程毛细管柱(总长 cm，有效长度56 cm，内径75 μm，德国Agilent公司);Wate Oasis MCX固相萃取小柱(3 mL，60 mg);Effendorf 5804高速冷冻离心机(德国Effendorf公司); Sartorius PB21 pH计(德国Sartourius公司)。电泳缓冲溶液： 50 mmol/L甲酸50 mmol/L甲酸铵(pH ，色谱纯);三聚氰胺标准品(纯度99%，Sigma公司)，用V(20%甲醇)∶V(水)=2∶8混合液溶解成500 mg/L储备液;三氯乙酸、甲醇等其它试剂均为分析纯;实验用水均为超纯水。 鸡蛋样品的前处理 生鸡蛋全蛋搅拌均匀，准确称取 g，加入20 mL 2%三氯乙酸溶液，超声10 min、 振荡10 min后，以9000 min离心5 min，上清液过固相萃取小柱(SPE， 预先用3 mL甲醇和3 mL水活化小柱)，自然流干后分别用3 mL水和3 mL甲醇洗涤，抽干SPE柱，用5 mL 5%氨化甲醇(V/V)洗脱。洗脱液在50 ℃用N2吹干，以500 μL 20%甲醇H2O复溶，滤膜过滤后上机检测。 熟鸡蛋用匀浆机充分匀浆后准确称取 g，其余处理过程同生鸡蛋。 实验方法 毛细管电泳运行电压25 kV; kPa×8 s进样;检测波长232 nm;温度25 ℃。为提高分析的重现性，毛细管在进样前用运行缓冲溶液冲洗20 min; 进样间用缓冲溶液冲洗3 min; 测定结束用 mol/L NaOH 冲洗5 min，超纯水冲洗10 min。 三聚氰胺储备液用20%甲醇水依次配制成1、 5、 10、 20、 40、 80和100 mg/L工作液，每个浓度进样3次，以分析物的峰面积和浓度建立校准曲线。 3 结果与讨论 分离缓冲溶液的优化 对柠檬酸柠檬酸三钠、甲酸甲酸铵、Tris碱盐酸、乙酸乙酸铵和磷酸盐5种缓冲溶液进行比较。结果表明，分析物在后2种缓冲溶液中峰展宽;在前3种体系中响应高、峰形好; 但在Tris缓冲体系中信号不稳定; 而柠檬酸根因其在低波长有微弱的紫外吸收导致基线不如甲酸体系平稳，最终选择甲酸甲酸铵为分离缓冲液。考虑到离子强度高导致分离时间延长、但过低会影响分析物的响应，所以选择50 mmol/L甲酸50 mmol/L甲酸铵。 pH是毛细管电泳分离的重要参数，三聚氰胺pKb=5，所以在pH ～范围内进行考察，得知随着pH增大，分析物的迁移时间延长。结合实际样品谱图中的干扰峰，在杂质峰不干扰药峰且分离时间最短的前提下，最后选择pH 。 仪器稳定性分析 在同样的分离条件下使用同一根毛细管柱，对同一样品连续测定3 d，每天进样6次，测定其迁移时间和峰面积的相对标准偏差(Ds)。结果