谷氨酸棒状杆菌基因编辑技术综述.doc

谷氨酸棒状杆菌基因编辑技术综述 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：谷氨酸棒状杆菌基因编辑技术综述 1 1 、传统基因编辑技术 3 2、 CRISPR技术 6 3 、谷氨酸棒杆菌基因编辑的发展趋势 9 4、 结语 10 文2：水稻育种中基因编辑技术的应用 10 1 CRISPCas9技术 11 2 基因编辑的应用 11 3 基因编辑的优势及面临的问题 14 参考文摘引言： 15 原创性声明（模板） 16 文章致谢（模板） 17 正文 谷氨酸棒状杆菌基因编辑技术综述 文1：谷氨酸棒状杆菌基因编辑技术综述 Abstract：　Corynebacterium glutamicum， an important microorganism to produce amino acids and organic acids， has been widely applied in food and medicine fields. Therefore， using editing tools to study the function of unknown genes in C. glutamicum has great significance for systematic development of industrial strain with efficient and novel production capability. Recently， gene editing has been greatly developed. Traditional gene editing based on homologous recombination and gene editing mediated by nuclease are successfully applied in C. glutamicum. Among these， the CRISPR system has been developed to be a main tool used for gene knockout of C. glutamicum due to its advantages of efficiency， simplicity and good target specificity. However， more efficient and reliable knockout system is still urgently demanded， to help develop high-performing strai in industrial application。 Keyword：　Corynebacterium glutamicum; gene editing; homologous recombination; CRISPR; 谷氨酸棒状杆菌Corynebacterium glutamicum是从土壤中分离到的一种非致病性的兼性厌氧菌，是革兰氏阳性菌[1]。自Kinoshita[2]等在20世纪 50年代研究发现谷氨酸棒状杆菌可以高产谷氨酸之后，利用复杂繁琐的化学合成法合成谷氨酸的技术逐渐被淘汰，新的微生物发酵生产技术成为氨基酸生产的主要技术，由此开启了谷氨酸工业生产的新纪元。除谷氨酸外，谷氨酸棒状杆菌还被用于赖氨酸、异亮氨酸和维生素D等的生产[3，4，5，6]，在食品、医药、农业等领域得到了广泛应用。随着分子生物学技术的发展，谷氨酸棒状杆菌在基因工程改造方面的研究逐渐深入。Ozaki等于1984年首次从谷氨酸棒状杆菌中分离得到质粒DNA并进行基因操作[7]。基于这些质粒，研究人员构建了大肠杆菌-谷氨酸棒状杆菌穿梭载体，并建立了高效的DNA转化技术。从此，谷氨酸棒杆菌中的基因操作技术得以开发，并成功地用于基因功能的分析及生产菌株的构建[8]。目前，已经对53株谷氨酸棒状杆菌进行了基因组测序，如谷氨酸棒杆菌ATCC13032[9]、谷氨酸棒状杆菌S9114[10]、谷氨酸棒状杆菌ATCC14067[11]等，为深入了解谷氨酸棒状杆菌的代谢机制，发掘其更多生产功能提供了依据。 基因编辑技术是对生物体内源基因进行DNA的插入、删除、修改或替换[12]。传统的基因编辑技术主要是以同源重组为基础进行基因组的定向修饰，随着基因工程技术的不断发展，基于核酸酶的基因编辑技术得以开发利用，其原理是通过核酸酶特异性地识别并切割靶DNA双链，激发细胞内源性的修复机制，从而实现基因定向改造[13，14]。本文主要是对谷氨酸棒状杆菌现有报道的基因编辑技术