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大炎肽与乳腺肿瘤恶化的关系 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：大炎肽与乳腺肿瘤恶化的关系 1 1资料与方法 2 文2：大炎肽与乳腺肿瘤恶化的关系 5 1资料与方法 7 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 大炎肽与乳腺肿瘤恶化的关系 文1：大炎肽与乳腺肿瘤恶化的关系 Association of Daintain Disease Progression in breast Carcinomas Abstract：ObjectiveTo investigate the spatial distribution of a new bioactive intestine peptide daintain in different kinds of breast tumou. MethodsThe expression of daintain in 66 cases was evaluated by immunohistochemistry analysis. ResultsIt has been found that there were significantly higher positive rate(90%) in breast cancer cases( P Key words：breast tumor; Daintain; Immunohistochemistry 0引言 乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤，占女性患者恶性肿瘤的四分之一。近年来，该病的发病率在明显上升，美国和北欧的发病率高达十万分之七十至九十。寻找乳腺癌的早期诊断分子标记及其组合迫在眉睫。目前，已经发现有许多免疫组化标记物在乳腺癌中有不同程度的表达。它们主要是表皮膜抗原(EMA)、表皮生长因子受体(EGFR)、生长因子Her2eu(cerbB2)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、核增殖抗原(PCNA、Ki67)等。这些标记分别在肿瘤早期诊断、治疗监测和预后方面起到了一定的作用。进一步研究、开发导致乳腺肿瘤恶化分子标识物及其诊断、治疗最佳组合将为乳腺癌患者带来希望。Daintain是从猪肠中纯化、含146个氨基酸的活性肽 [1]，与Uta等 [2，3]鉴定来自老鼠脊髓和人的AIF1蛋白高度相似。因此命名为DaintaiAIF1。该基因定位在人类MHC区域，编码蛋白参与自身免疫和炎症反应 [46]。DaintaiAIF1分布在肠粘膜固有层、肝巨噬细胞、中枢神经系统和淋巴等免疫器官，可能是上述器官中的一种强抗原性标记物，因此称之为大炎肽。大炎肽不仅和炎症反应相关，而且参与细胞介导的自身免疫反应 [7]。实验证明，它存在于老鼠和人类肿瘤的活化细胞中 [8]。AIF1在血管增生疾病中的作用机制可能是它缩短了细胞周期 [9]。而血管增生及其相关因子已经确定为乳腺癌标记 [10，11]。AIF1能聚合F肌动蛋白并调节Rac1的活性 [12]，而肌动蛋白和Rac1与促进肿瘤活动和浸润的RhoC GTP酶高度相关[13，14]。因此，我们用免疫组织化学方法研究大炎肽与乳腺肿瘤恶化的关系。 1资料与方法 病理标本研究组织取自湖北省肿瘤医院病理科2004年乳腺疾病患者手术切除标本。共66例，其中，乳腺癌30例（导管浸润癌23例、小叶浸润癌4例、非典型髓样癌1例、乳头状癌1例、淋巴结转移性恶性肿瘤1例）；导管内乳头状瘤11例；纤维腺瘤11例；慢性乳腺增生病10例以及4例脂肪瘤。采用PBS和非免疫血清作大炎肽多克隆抗体阴性对照。 免疫组化分析所有组织用10%中性福尔马林固定、常规石蜡包埋。连续切片3张，片厚4μm。置37℃烘干后分别进行HE和大炎肽免疫染色。免疫组织化学技术参见韦淑琴等[15] 。抗原修复时间和抗体稀释浓度在大批实验前进行了摸索。二甲苯脱蜡、分级酒精复水；加3% H2O 2，搁置室温10 min；将枸橼酸煮开，微波修复10 min；加1%白蛋白，室温孵育20 min；滴加μg/μl一抗，37℃孵育2 h；滴加羊抗兔HRP，室温20 min。每一步骤（除添加白蛋白一步之外）完成后都用PBS洗3遍，擦干波片。DAB染色，苏木素复染，冲洗后依次酒精逐级脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。 判断标准根据切片中daintain免疫组化染色不同分为3种即强阳性、阳性和阴性。强阳性为棕黄色或棕褐色(++);阳性黄色（+）;组织不着色或着淡黄色为阴性（-）。染色结果由两位病理专家诊断，结果一致的才用于统计分析。 2结果 大炎肽在乳腺肿瘤或增生病中的免疫染色结果见表1。乳腺癌组织中，6例强阳性，20例阳性， 2例表现阴性，2例部分区域表现