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液相色谱—质谱联用的原理及应用 Quattro LC/Micro Contents 一、色谱法引论 色谱法（chromatography） 是一种利用物质的物理化学性质建立起来的分离、分析方法。 广泛用于复杂化合物的分离分析。 实质：分离 目的：定性或定量分析 色谱法的由来 1906年由俄国植物学家Tswett创立 首先用于 植物色素分离 50年代后期出现了气相色谱-质谱联用技术。 1955年Golay建立了毛细管气相色谱法。 60年代末发展了高效液相色谱法。 70年代发展了薄层扫描技术。 80年代超临界流体色谱和毛细管电泳 色谱法分类 按两相分子的聚集状态分为： 流动相 固定相 类型 二、质谱法 质谱分析法是将不同质量的离子按质荷比（m/z）的大小顺序收集和记录下来，得到质谱图，用质谱图进行定性、定量分析及结构分析的方法 质谱分析法是物理分析法，早期主要用于相对原子质量的测定和某些复杂化合物的鉴定和结构分析 随着GC和HPLC等仪器和质谱仪联机成功以及计算机的飞速发展，使得质谱法成为分析、鉴定复杂混合物的最有效工具 1、突出特点（与核磁、红外、紫外相比） 1） 质谱法是唯一可以确定分子质量的方法 2） 灵敏度高，样品用量少 通常只需微克级样品，检出限可达10-14 g 3） 应用范围广 质谱仪种类很多，应用范围广，可进行同位素分析，也可进行化学分析，可进行无机成分、有机结构分析 被分析对象：气体、液体、固体 局限性： (1)异构体，立体化学方面区分能力差。 (2)重复性稍差，要严格控制操作条件。所以不能象低场NMR，IR等自己动手，须专人操作。 (3)有离子源产生的记忆效应，污染等问题。 (4)价格稍显昂贵，操作有点复杂。 2、质谱仪的联用技术 质谱仪可以与其他仪器联用，如气相色谱-质谱联用（GC/MS）、 高效液相色谱-质谱联用（HPLC/MS）；也可以质谱-质谱联用（MS-MS）。 （1） GC/MS、HPLC/MS 仪： 基于色谱和质谱的仪器灵敏度相当，加之使分离效果好的色谱成为质谱的进样器，而速度快、分离好、应用广的质谱仪作为色谱的鉴定器，使它们成为目前最好的用于分析微量的有机混合物的仪器。 ＬＣ－ＭＳ联用仪器的组成包括ＬＣ、接口和ＭＳ三部分， （2）液质联用与气质联用的区别: 气质联用仪(GC-MS)是最早商品化的联用仪器，适宜分析小分子、易挥发、热稳定、能气化的化合物；用电子轰击方式（EI）得到的谱图，可与标准谱库对比。 液质联用(LC-MS)主要可解决如下几方面的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定；没有商品化的谱库可对比查询，只能自己建库或自己解析谱图。 具体应用领域 医药学：药物代谢、药物动力学、杂质分析、天然产物分析 生物化学：肽、蛋白质、寡核苷酸、糖 环境化学：农药和农残分析、有机污染物、土壤/食品/水分析 临床医学：新生儿检查、糖化血红蛋白（糖尿病）、血红蛋白变异、胆酸 食品科学：香料、添加物、包装物、蛋白质、致癌物 法医学：滥用药物、爆炸物、兴奋剂检测 兽医学：兴奋剂、磺胺类药物、抗体 合成化学：有机金属化合物、有机合成物 有机化学：表面活性剂、染料 （3）MS-MS： 质谱-质谱法是70 年代后期迅猛发展起来的。这种方法是指用质谱作质量分离的质谱技术(mass separetion-mass spectracharacterization)。 它可以研究母离子和子离子的关系，让大的离子进一步裂解，获得裂解过程及离子组成的信息。它有几种称呼，如质谱-质谱法（MS-MS 或MS/MS）,串联质谱,二维质谱法,序贯质谱。 本实验室的质谱检测器为三重四极杆检测器，属于MS/MS 型质谱检测器 三、质谱分析法原理和仪器 1、质谱分析法基本原理 质谱法一般采用高速电子来撞击气态分子，将电离后的正离子加速导入质量分析器，然后按质荷比（m/z）的大小顺序进行收集和记录，得到质谱图，根据质谱峰的位置进行定性和结构分析，根据峰的强度进行定量分析 2、基本术语 （1）质谱图：一般都采用“条图”，或称为棒状图。在图中横轴表示质荷比（m/z，因为Z 接近于1，故实际上m/z 多为离子的质量）。纵轴则表示峰的相对强度(RA,相对丰度)。 (2)质荷比: 离子质量(以相对原子量单位计)与它所带电荷(以电子电量为单位计)的比值,写作m/Z。 (3)峰: 质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰。 (4)离子丰度: 检