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1、微生物工程的应用领域有？ （1）在食品工业的应用 醇及溶剂、有机酸、多糖、清洁能源等 （5）在农业中的应用 生物农药、生物除草剂、生物增产剂等 （6）在环境保护中的作用 污水处理（厌气法、好气法） E.coli lacZ 连接在 ? 噬菌体的 PL启动子下， lacZ 4、抗病毒药物产生菌的筛选分离方法 第三章 优良菌种的选育 1、提高质粒稳定性的方法？ 2、质粒不稳定的产生原因？ 3、影响外源基因在酵母中表达的因素？ 4、酵母菌的载体系统？ 载体有与酵母染色体重组的序列---整合到染色体中，具有很好的稳定性， 拷贝数—个 5、在大肠杆菌中真核基因的表达形式 ① 影响表达效率因素：启动子的强度、核糖体结合位点的有效性、SD序列 和起始密码子 ATG之间的距离、密码子的组成 ② 启动子---转录水平上影响基因表达；有强弱之分；下游应有转录终止子； ③ SD序列和起始密码子 ATG之间的距离及序列----mRNA翻译成蛋白质的效 率有明显影响 （3）表达产物的稳定性 减轻负荷：将细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段 8、原生质体制备与融合方法 （3）融合子的检出 在选择性培养基上检出，通过两个遗体标记互补确定 10、酵母菌交配方式 孢子与孢子、单倍体细胞与孢子、细胞间 11、原核表达系统包括 13、组成型突变株的筛选 15、优良菌种的基本特性 ⑧具有抗噬菌体感染的能力。 （1）遗传体系 （2）杂交方法：混合培养法、玻璃纸法、平板杂交法 20、诱变育种的基本方法 第四章 菌种保藏的原理和方法 1、简单介绍斜面保藏法 2、简单介绍沙土管干燥保藏法 4、简单介绍液氮保藏法 保藏：效果好、方法简单、对象最广泛 第五章 微生物的代谢调节和代谢工程 E D A B C F G 30% E D B C A F G 15% E D B C A 20% 90% F G 2、次级代谢的调节类型包括 E D A B C F G 30% E D B C A F G 15% E D B C A F G 4、发酵条件的控制包括 甘油代替果糖---嗜热脂肪酵母---淀粉酶产量 （4）添加生物合成前体 6、次级代谢的反馈调节类型 高浓度磷酸盐对抗生素等次级代谢产物的合成有较强的抑制作用。调节机制： 抑制酶的作用、能荷变化、竞争金属离子 改变细胞的通透--代谢产物分泌--避免末端产物反馈 方法：限制生物素浓度、+青霉素、+表面活性剂、控制 Mn2+、Zn2+ 8、代谢工程的应用的三个方面 9、酶合成调节的机制并举例 第六章 培养基 ①通气条件：在通气条件差的情况下，最适的发酵温度应比在正常良好通气条 件下低一些；这是由于在较低的温度下，氧溶解度相应大些，菌的生长速率 相应小些，从而弥补可能因通气不足而造成的代谢异常。 ②培养基成分和浓度：在使用较稀薄或较易利用的培养基时，提高培养温度则 养料往往过早耗竭，导致菌丝过早自溶，使抗生素产量降低。 （2）空气流量 （6）离子强度的影响 7、影响微生物需氧量的因素 （1）微生物种类 CO2是菌体代谢产生的气态终产物，它的生成与菌体的呼吸作用密切相关， 发酵过程中不及时将培养液中的 CO2排出，势必影响菌的呼吸，进而影响菌 的代谢。 8、PH值对发酵菌的影响 ④ 硅酮类：聚二甲基硅氧烷 12、泡沫对发酵的危害 第八章 发酵过程的参数检测和自动控制 1、发酵过程的自动控制三方面 2、发酵过程的参数分类及内容 （1）直接参数 ① 物理参数：温度、压力、搅拌速度、通气流量、泡沫水平、生物热、黏度 ② 化学参数：pH、溶氧浓度、溶解 CO2 浓度、碳/氮源含量、代谢物浓度 （2）间接参数：摄氧率 OUR、CO 释放率 CER 3、发酵过程的参数检测形式 致死温度：杀死微生物的极限温度称为致死温度 （1）优点： 配料罐（兼作预热） 输料泵 4、连消塔连续灭菌流程 5、板式换热器连续灭菌流程 连消塔（器） ① 可采用高温短时灭菌，培养基受热时间短，营养成分破坏少，有利于提高 发酵产率； 7、机械搅拌自吸式发酵罐的优、缺点 （1）优点： H----柱体高(m) H / D = 1.7 ～ 4 HL---液位高度（m） D----罐内径(m) d----搅拌器直径 B----最下一组搅拌器距罐底的距离 W----挡板宽度