NKgammaPGA复合物注射液的制备和毒性评价.docVIP

NKgammaPGA复合物注射液的制备和毒性评价 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：NKgammaPGA复合物注射液的制备和毒性评价 1 1、材料 3 2、方法 4 3、结果与讨论 7 4、结论 12 文2：关节腔注射用雷公藤甲素微球的制备与毒性评价 12 1材料与方法 13 参考文摘引言： 19 原创性声明（模板） 21 文章致谢（模板） 21 正文 NKgammaPGA复合物注射液的制备和毒性评价 文1：NKgammaPGA复合物注射液的制备和毒性评价 血栓性疾病是指血栓形成和血栓栓塞2种病理过程所引起的一类疾病，其发病率和死亡率很高，严重威胁着人类的健康[1]。无论溶栓[2]或介入[3]治疗，实现早期快速的血运重建对于治疗血栓性疾病至关重要[4]。大多数基层医院无法展开介入手术，而静脉溶栓治疗始于20世纪80年代，实施较为容易，且疗效已得到肯定[5]。目前临床上常用的溶栓药物大多为直接的或间接的纤溶酶原激活剂，这些溶栓药的应用主要受限于溶栓时间窗[6]，因此新型溶栓制剂的研发，对于防治血栓栓塞类疾病意义重大。 纳豆激酶(nattokinase，NK)是一种具有强烈纤溶活性的丝氨酸蛋白酶[7]。与目前常用的溶栓药物相比，NK除具有生产工艺简单、稳定性好、半衰期长、特异性强、溶栓活性高等优点外，其最大的优势在于可以直接溶解纤维蛋白[8]，溶解陈旧性血栓[9] 鉴于NK在溶解血栓和预防血栓性疾病的发生等方面的突出疗效，近年来将其作为功能性食品和添加剂的产品不断面世[10]。但由于NK口服制剂难以用于病情危急、昏迷、呕吐的患者，因此将其开发成注射剂更有助于药理作用的发挥[9]。然而，虽然NK的安全性较高，但静脉给药时仍存在容易出血的风险，因此亟需制备低毒性的NK注射剂。 从结构上看，NK是一种碱性蛋白酶，其由275个氨基酸残基构成的单链多肽酶，分子量为28kDa，表面有8个赖氨酸残基，等电点(isoelectricpoint，pI)为±[11，12]。当pHpI时，其带正电，所以可考虑在NK注射液中加入阴离子化合物，通过静电结合，在NK周围形成保护层，起到缓释作用，从而降低NK毒性[13] γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamicacid，γ-PGA)是由L-谷氨酸(L-Glu)和D-谷氨酸(D-Glu)通过肽键结合形成的一种多肽分子，在自然界或人体内能降解成内源性物质Glu，不易产生蓄积和不良反应[14]。γ-PGA的侧链上具有大量的羧基(-COOH)，pI为[15]，当pHpI时，其带负电，易和一些药物结合生成稳定的复合物，是一类理想的体内可生物降解的医药用高分子材料[14，15] 在本研究中，尝试将NK和γ-PGA通过静电结合的方式制备成NK-γ-PGA复合物，以达到降低NK注射液毒性的目的。 1、材料 仪器 BS124s电子分析天平、PB-10型pH计均来自德国赛多利斯公司；DH-2500电热恒温培养箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；TM-1动态灭菌器(沈阳天美达科学仪器有限公司)；Nicomp-380激光粒度测定仪(美国ParticleSizingSystems公司) 药品与试剂 NK溶液(·mL-1，广东双骏生物科技有限公司，批号：150316)；γ-PGA(平均分子量1000kD，山东福瑞达生物科技有限公司，批号：)；琼脂糖(西班牙Biowest，批号：142075)；牛纤维蛋白原(每支90mg，中国药品生物制品检定所，批号：GHSJ-FQPH)；凝血酶(每支500U，珠海经济特区生物化学制药厂，批号：);5%葡萄糖注射液(5%Glu，辰欣药业股份有限公司，批号：);50%葡萄糖注射液(50%Glu，天津药业集团新郑股份有限公司，批号：)；灭菌注射用水(石家庄四药有限公司，批号：)；磷酸钠(Na3PO4·12H2O，西陇化工股份有限公司，批号：150309)；磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O，西陇化工股份有限公司，批号：131104)；氯化钠注射液(山东华鲁制药有限公司，批号： 动物 昆明种小鼠18～22g，♂，60只，沈阳药科大学实验动物中心，许可证号：SCXK(辽)2010-0001；新西兰白兔体质量为，♂，1只，沈阳药科大学实验动物中心，许可证号：SCXK(辽)2014-0002。 2、方法 注射液的毒性考察 NK注射液(10kU·mL-1)的配制：精密移取NK溶液(·mL-1)于5mL量瓶中，加入%Glu注射液，用灭菌注射用水稀释至刻度，摇匀，过μm的微孔滤膜，即得。 取15只小鼠，随机分成5组(每组3只)，单次尾静脉注射NK注射液，给药剂量分别为150，120，100，80和40kU·kg-1。