分子生物学复习.docVIP

第一章 绪论 分子生物学的研究对象是核酸和蛋白质大分子的结构与功能 以核酸为中心，研究蛋白质与DNA相互作用的规律、蛋白质与蛋白质相互作用的现象等，从分子水平了解生命活动的本质 主要研究内容：核酸、蛋白质大分子物质的结构与功能及细胞信号传到与通讯等 艾滋病研究 艾滋病：获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)，是有艾滋病毒(human immunodeficiency virus, HIV)引起的一种传染性疾病。 HIV是由包膜蛋白gp120与CD4 T 淋巴细胞表面的CD4受体结合后，在gp41透膜蛋白的协助下，伸入CD4+细胞膜，将病毒基因注入细胞内。 HIV是单链逆转录病毒，其基因组含有9747bp的核酸 含有两个亚型：HIV1、HIV2 由20面体构成，表面的糖蛋白呈刺突样分部，直径约为100nm 鸡尾酒疗法(combination therapy)：美籍华裔何大一提出的综合治疗的方法，即联合使用逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂进行治疗 目前已经上市的逆转录酶抑制剂的核苷类药物：齐多夫定、去羟肌苷等；非核苷类药物：奈韦拉平、地拉韦啶、Efavirenz等 第二章 核酸 核 酸(nucleic acid)是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，携带和传递遗传信息。 脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)：主要以双链结构形式存在，90%以上分布于细胞核，其余分布于核外如线粒体，叶绿体，质粒等。携带遗传信息，决定细胞和个体的基因型(genotype)。 核糖核酸(ribonucleic acid, RNA)：常以单链形式存在分布于胞核、胞液。参与细胞内DNA遗传信息的表达。某些病毒RNA也可作为遗传信息的载体。 DNA的复制 1953年，Watson和Crick提出了遗传物质复制的详细假说：半保留复制(semiconservative replication) 1958年，Meselson和Stahl利用同位素标记技术在大肠杆菌中首次证实了DNA的半保留复制。 DNA的复制体系 DNA复制是一个十分复杂的生物合成过程，需要30多种酶和蛋白质参与。每个DNA复制的独立单元被称为复制子(replicon)，主要包括复制起始位点(origin of replication)和终止位点(terminus)。整个DNA复制“机器”被称为DNA复制体系(DNA replicase system 或DNA replisome)。 DNA聚合酶 DNA聚合酶的定义：以DNA为复制模板，将DNA由5’端点开始复制到3’端的酶。 DNA聚合酶以4种脱氧核苷磷酸为底物，还需要模板DNA、引物和Mg 2+。 DNA聚合酶催化合成反应的机制：在生长的DNA链（或引物链）末端的3’-OH对另一新加入的脱氧核苷三磷酸α-位的磷酸进攻，形成磷脂键，并放出一个焦磷酸。每放出一个焦磷酸，即形成一个磷酸二酯键，就延长一个核苷酸单位的DNA链。 原核生物中的DNA聚合酶有五种，分别命名为DNA聚合酶I~V (pol I~V)。前三种酶具有多种酶活性的多功能酶，参与原核生物DNA复制的酶主要是pol Ⅲ和polⅠ。 pol I是1956年由A. Kornberg等在大肠杆菌中发现的，也是研究最为深入的一种DNA聚合酶。 polⅠ为单一肽链的大分子蛋白质,相对分子量为109000，是一个多功能酶，具有5′→3′聚合酶、3′ →5′外切酶和5′→3′外切酶活性。可被特异的蛋白酶水解为两个片段，其中的大片段称为Klenow fragment，具有5′→3′聚合酶活性和3′→5′外切酶的活性 polⅡ为多亚基酶，它有5→3聚合酶和3→5外切酶活性，但没有5→3外切酶活性，且酶活性很低，目前认为其主要参与DNA的修复。 pol Ⅲ由十种亚基组成，其中α亚基具有5′→3′聚合DNA的酶活性，因而具有复制DNA的功能；而ε亚基具有3′→5′外切酶的活性，因而与DNA复制的校正功能有关。 pol Ⅳ和Ⅴ是1999年被发现，涉及DNA的错误倾向修复(error-prone repair)。当DNA受到较严重损伤时，即可诱导产生这两个酶，使修复缺乏准确性（accuracy)，因而出现高突变率。高突变率虽会杀死许多细胞，但至少可以克服复制障碍，使少数突变的细胞得以存活。 DNA 解旋酶(gyrase) 天然DNA的负超螺旋虽然有利于DNA的解旋，但随着复制的进行，复制叉前方亲代DNA中仍积累巨大的张力，因此复制中需要DNA解旋酶去除接连产生的扭曲张力。 大肠杆菌中的DNA解旋酶又称拓扑异构酶Ⅱ(topoisomerase Ⅱ, Top Ⅱ)，有四个亚基组成四聚体α2β2。 真核生物拓扑异构酶Ⅱ 呈α