基因工程与无缝克隆.pptx

;重 组 DNA 技 术;一、重组DNA技术相关概念 ;DNA克隆 应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA ( binant DNA) 。 ; 限制性核酸内切酶—主要用于DNA分子的特异切割 甲基化酶—用于DNA分子的甲基化 连接酶—用于DNA和RNA的连接 核酸酶—用于DNA和RNA的非特异性切割 聚合酶 (Taq酶、末端转移酶) —用于DNA和RNA的合成 末端修饰酶（多聚核苷酸激酶、碱性磷酸酶）—用于核酸末端修饰 其它酶类—用于细胞的破壁，转化，核酸纯化，检测等;1. 限制性核酸内切酶 （restriction endonuclease）; 50年代初发现细菌能将外来DNA片段在某些专一位点上切断，从而保证其不为外来噬菌体所感染，而其自身的染色体DNA由于被一种特殊的酶所修饰而得以保护，这种现象叫做限制－修饰，它们由三个基因位点所控制：hsd R, hsd M, hsd S, 十年后，人们搞清了细菌的限制与修饰分子