细胞因子检测技术.pptxVIP

会计学;细胞因子（cytokine, CK）指由免疫细胞或非免疫细胞（血管内皮细胞、成纤维细胞等）合成与分泌的，具有多种生物功能的小分子蛋白质的统称。因能调节多种细胞的生理功能而得名。可介导细胞与细胞之间相互作用，介导炎症反应，参与免疫应答和组织修复等。;以生物学作用进行划分的分类;; 二、 细胞因子检测的方法与原理;1、细胞增殖或增殖抑制试验 2、细胞毒活性测定 3、抗病毒活性测定法 4、细胞趋化活性测定法;1、细胞增殖和增殖抑制测定法; 通过检测细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。在细胞的增殖过程中，DNA合成的增加使得指示细胞对核苷或碱基的需求增多，若将核苷标记上可以示踪的同位素（3H/125I ），通过检测细胞内的同位素含量，则可反映细胞增殖的程度。;特点：不使用放射性核素， 以细胞代谢变化为增殖指征 指示细胞的增殖情况与线粒体代谢活性相关 ;2、细胞毒活性测定;Wish、Hep2/c 人干扰素 L929 小鼠干扰素 Ratec 大鼠干扰素 A549 MDBK 多种族的IFN-α和IFN-γ;趋化性(chemotaxis)： 诱导细胞向由趋化因子低浓度处向趋化因子高浓度处作定向移动的特性,可采用琼脂糖和微孔小室趋化试验。 化学增活性(chemokinesis)： 细胞因子增强细胞的随机运动能力的特性,可采用琼脂糖小滴化学动力学试验检测。;;靶细胞的选择与培养;各类细胞因子检测的常用靶细胞;各类细胞因子检测的常用靶细胞;敏感性较高 特异性不高 操作繁琐 易受干扰;（二）免疫学检测;1、ELISA方法;敏感性偏低 不能判断细胞因子的生物学活性。;2、酶联免疫斑点试验(ELISPOT或ElisaSpot) ;;3、流式细胞分析法;;使用流式细胞分析法，可以：;免疫学测定方法学评价;（三）分子生物学检测; 三、常用细胞因子的检测方法;;待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929）;肿瘤坏死因子的测定示意图;结束