黄色须腹菌液体菌剂保存温度及活性讨论.docxVIP

PAGE PAGE 1 黄色须腹菌液体菌剂保存温度及活性争辩 黄色须腹菌液体菌丝菌剂保存温度及活性争辩  马仕波，叶建仁*  (南京林业高校森林资源与环境学院，江苏南京210037)   1.1.3仪器  摇床、恒温培育箱、电子分析天平、pH 计、超净工作台、立式电热压力蒸汽灭菌锅、粉碎机、恒温电热鼓风干燥箱、上海国强自动搅拌新概念高级液体发酵罐。  1.2试验方法  1.2.1酸性磷酸酶的测定  取发酵液菌丝若干，用滤纸吸干发酵液，称取1g 菌丝样品，用5mL 研磨缓冲液在研钵中冰浴研磨成浆，再用5mL 研磨缓冲液冲洗，转移至离心管中，在20000rpm 下离心10min 。吸出上清液，即为酶粗提取液。放在冰箱储存备用。  取酶液0.5mL ，加水至1mL ，然后加入缓冲液1mL 和对硝基酚磷酸钠溶液0.1mL 。空白对比用1mL 研磨缓冲液代替酶制剂。充分混匀后，放在30℃恒温箱中保温10min ，不时摇动。10min 后，加入1mL0.5molNaOH 溶液，充分混合，终止反应，并使对硝基酚呈黄色。在400nm 波长下测吸光度A 。  以每毫克种子每分钟水解底物的nmol 数表示。  W  109V 3.1AV/0.01mg min /nmol 1?=?