HPCE技术在中药指纹图谱研究的应用进展.docVIP

HPCE技术在中药指纹图谱研究的应用进展 HPCE技术在中药指纹图谱研究的应用现状 摘 要:HPCE技术是近几年来发展较快的中药指纹图谱研究方法之一，通过概括其在指纹图谱上的应用现状，分别从样品提取、电泳条件、参照物等方面做以比较，为HPCE技术在中药指纹图谱研究方法中提供参考。 关键词：中药；高效毛细管电泳；指纹图谱；样品提取 引言 中药指纹图谱它具有系统性、特征性和稳定性的特点，是一种综合的、宏观的和可量化的鉴别手段，用以对中药材和中成药进行鉴别真伪，评价原料药材、半成品和成品质量的均一性和稳定性。目前，用于中药指纹图谱研究的方法分为色谱法和光谱法两类，以色谱法居多，其中又以HPLC最常用。但HPLC进行中药成分分析常遇到以下一些问题：(1)中药成分复杂，色谱柱易受污染，柱寿命短，且难以再生； (2)色谱柱上沉积的污染物，经常以杂质峰的形式出现； (3)分析运行成本高；(4)对于含极性成分较多的中药，其指纹的特征性不强。 HPCE技术是近几年来发展较快的中药指纹图谱研究方法之一，它刚好可以弥补以上缺点，虽然该技术的应用没有HPLC广泛，但它具有许多潜在的优势： (1)它具有柱效高、快速、进样体积小等特点；(2) 抗污染能力强，前处理简单，甚至于不需要前处理；(3)分析运行成本低； (4)水溶性样品的指纹特征性 进样方式、检测器等。其中背景电解质的选择尤其重要，主要是缓冲盐的种类、缓冲溶液的浓度及pH等。分述如下。 2.1 毛细管规格 常用内径50Lm或75Lm的石英毛细管，有效长度一般在40~60cm左右，总长度约50~67cm。 2.2 背景电解质 电解质的种类、浓度及pH对分离的影响较大，因为它直接影响电渗淌度，通常在实验当中要对其进行至少5个水平的实验考察。 (1)电解质的种类 一般为磷酸盐或硼酸盐的缓冲溶液，也有硼酸盐和磷酸盐混合体系，也有采用了1mmol/L Tris-10mmol/LH3BO3-015%四乙烯五胺-01025mmoL/LCTAB体系为缓冲体系[4]。为改善电泳峰的峰形及分离情况，有时会在缓冲溶液中加入有机改性剂。 (2)电解质的pH值 在pH9的硼砂缓冲液中电渗速度约为2mm /s，而在pH3的背景电解质中电渗速度约减小1个数量级。因此，背景电解质的pH值通常要大于7。当然有时在分析时会用酸性电解质，如对海马类药材蛋白质的分析就可用pH3.5的缓冲液[5]。 2.3 电压 范围在10KV~30KV。 2.4 进样方式 压力进样、重力进样、虹吸进样和电动进样。 2.5 检测器 一般是紫外检测器，分为可调波长检测器(VWD)与二极管阵列检测器(DAD)两类。 3 参照物的选择 3.1 对照品内标物及内参比峰的选择 （1）通常选择药材或者制剂的活性成分，如阿魏酸和吴茱萸碱，或指标成分如绿原酸[6]。复方中药注射剂中的君药的活性成分或指标成分的一个或多个单体作为参照物，要求参照物在毛细管电泳图谱上的电泳峰较大且无干扰。 （2）若存在适宜的内标物，可用内标物标定和考察其它电泳组分，如厚朴酚、对乙酰氨基酚和槲皮素。 （3）若无适宜的内标物或电泳图谱上无位置插入内标峰，也可选择电泳图谱上无干扰的迁移时间与峰高适宜的电泳峰为内参比峰。用内参比峰替代内标峰，进而标定和考察其它电泳组分，如僵蚕和太子参的指纹图谱研究[7]。 （4）若按所分析成分的种类看，多糖类成分的参照物一般选择鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、果糖、阿拉伯糖等单糖，并且这些单糖需要进行A-萘胺衍生化，如丹参多糖、野西瓜成熟果实中的多糖和羊栖菜多糖[8]组分的分析。而蛋白质类成分的参照物选择牛血清白蛋白[9]。核苷类成分则选择腺苷、鸟苷、尿苷和次黄嘌呤等核苷作为参照物。 3.2 参照物溶液的制备 制备参照物溶液所使用的溶液同供试品溶液的要求。 4 数据处理 4.1 方法学考察 指纹图谱当中的方法学考察一般包括精密度、稳定性和重复性等3方面。若涉及到标定对照品含量时，往往以参照物进行线性和精密度考察，如对金银花中绿原酸含量测定。若不需要标定含量时，通常直接以对照药材或供试样品的电泳峰[10]进行方法学考察。 4.2 指纹图谱的建立与评价 取供试品溶液按选定的条件进样分析，记录其色谱图。以样品电泳峰与参照物的保留时间和峰面积的比值定性，确定共有指纹峰，以此来建立该药物的对照指纹图谱。评价分析方法一是采用中药色谱指纹图谱计算机辅助相似性评价系统[11]，经校正，将谱峰自动匹配，进行谱峰差异性评价和整体相似性评价。这是中药色谱指纹图谱评价最常用的方法，通常同一品种的指纹图谱相似度一般应大于或接近0.9。二是孙国祥等[12]提出用色谱指纹图谱指数F和相对指数Fγ评价色谱指纹图谱，它包括3个方面：(1)有效