各种特殊生物显微镜的原理和使用.pptVIP

扫描？ X线上的荧光强度变化 多条线构成2维图像 第六十一页，共九十页。 X Y 扫描显微镜 Z 显示器 标本 * OLYMPUS 第六十二页，共九十页。 标本 PMT PC 为什么用PMT（光电倍增管）？ 相比CCD，PMT拥有更高的感光效率 更快的读出速度（微秒级） PMT采集时间信息——电脑还原为位置信息 第六十三页，共九十页。 第二十九页，共九十页。 用途 用于研究组织晶体物质及纤维等的光学性质 第三十页，共九十页。 微分干涉显微镜 无色透明活体标本的细微结构 图象呈浮雕状的立体感 观察效果更加逼真 第三十一页，共九十页。 1 原理 通过特制的棱镜将偏振光分解相互垂直，强度相等的光束，光束载极近的两点（小于显微镜的分辨率）上通过被检物体，从而在相位上略有差别，使图象呈现出立体三维感觉。 2 特点 可以使被检物体产生三维立体感觉 观察效果更直观 无须特殊物镜，与荧光观察配合更好 可以调节背景和物体的颜色变化而达到理想的效果。 第三十二页，共九十页。 第三十三页，共九十页。 荧光显微镜 一、原理 荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。 荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。 第三十四页，共九十页。 什么是荧光：物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是非温度辐射光——冷光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。 显微镜荧光利用光源激发——光化荧光 第三十五页，共九十页。 第三十六页，共九十页。 荧光的种类： 自发荧光（固有荧光） 二次荧光 第三十七页，共九十页。 荧光的性质： 吸收光，必需有激发光源 荧光波长＞激发波长（损失热能） 荧光强度极小于激发光的强度 有不同程度的衰减 荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率 第三十八页，共九十页。 二、荧光显微镜的种类： 透射式 落射式 第三十九页，共九十页。 第四十页，共九十页。 第四十一页，共九十页。 荧光显微镜 第四十二页，共九十页。 三、荧光显微镜主要部件 透射式 汞灯光源 激发滤色镜 吸收滤色镜 暗场聚光镜 物镜 落射式 汞灯光源 激发滤色镜 分色镜 吸收滤色镜 物镜 第四十三页，共九十页。 荧光显微镜内部构造 第四十四页，共九十页。 落射荧光显微镜光路图 第四十五页，共九十页。 透射荧光显微镜光路图 第四十六页，共九十页。 落射式荧光显微镜优点 由于物镜兼作聚光镜，不需要很多调节。 采用柯拉照明法，可利用孔径光阑和视场光阑的效果。 物镜数值孔径不受限制，在高放大被率时，也可以获得高分辨率的像。 厚的或不透明的标本也能观察，厚的盖玻片也能使用。 其它观察法也能与反射荧光结合使用，特别和相差法和透射微分干涉差法相结合。 可以避免不必要的荧光色衰褪现象。 第四十七页，共九十页。 超高压汞灯 第四十八页，共九十页。 荧光光源 一般采用超高压汞灯(50一200W)，它可发出各种波长的光，但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长，所以需加用激发滤片（一般有紫外、紫 色、蓝色和绿色激发滤片），仅使一定波长的激发光透过照射到标本上，而将其他光都吸收掉。 每种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性，一般都比激发光弱，为能观察到专一的荧光，在物镜后面需加阻断滤光片。它的作用有二：一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免干扰荧光和损伤眼睛。二是选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。两种滤光片必须选择配合使用。 第四十九页，共九十页。 荧光滤色片组 紫外光（UV）：激发光谱区域：330-400nm；?? 可见荧光起绐光谱：425nm 紫? 光 （V）：激发光区域：395-415nm；?? 可见荧光起绐光谱：455nm 蓝? 光 （B）：激发光谱区域：420-485nm；?? 可见荧光起绐光谱：515nm 绿? 光 （G）：激发光谱区域：460-550nm； ?? 可见荧光起