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糖化酶制剂测定方法 QBT1803-93 糖化酶测定方法 1/3 执行部门 质控部 页码 1. 试验方法 (除酶活力项目外，其它项目按 QB/T1803-93 标准执行) 1.1 酶活 力测定 1.1.1 定义 1ml 液体酶 (或 1g 固体酶粉)，于 40?、PH4.6 的条件下，1 小时分解可溶性淀 粉产生 1mg 葡萄糖，即为一个酶活力单位，以 u/ml(u/g)表示。 1.1.2 原理 糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分解 α,1.4 葡萄糖苷键生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸钠氧化，过量的次碘 酸钠，酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算出酶活力。 1.1.3 试剂和溶液 1.1.3.1 乙酸,乙酸钠缓冲溶液 (PH4.6) 称取乙酸钠 (CHCOONa?3HO)6.7g，溶于水中，加冰乙酸(CHCOOH)2.6ml，用水定 容 323 至 1000ml。配好后用PH 计校正。 1.1.3.2 硫代硫酸钠标准溶液 C(NaSO)=0.05mol/L 223 a 配制:称取硫代硫酸钠 (NaSO5HO)12.4克和碳酸钠 0.1 克溶于煮沸后冷却的蒸 溜 223.2 水中，定容至 1000ml，储于棕色瓶中密闭保存，配制后放置一星期标定使用。 b 标定:碘酸钾法 称取预先在 100,105?烘至恒重的分析纯碘酸钾 (KIO)3.567克，溶于 1000ml 蒸 馏水 3 中，即成0.1mol/L 碘酸钾溶液。然后吸取 10ml 于 150ml 三角瓶中，加入 0.5 克碘化钾(KI)，溶解后加入 1mol/LHSO2ml，用待标定的 0.05mol/L NaSO 溶液来滴 定，滴至淡黄色时，24 223 加 1%淀粉指示剂 2,3 滴，继续滴定至无色为终点。 c 计算: 碘酸钾溶液的摩尔浓度×10 NaSO 溶液的摩尔浓度= —————————————— 223 消耗 NaSO 的ml 数 223 1.1.3.3 碘标准溶液 碘溶液 C(1/2 I)=0.1mol/L 2 a 配制:称取碘化钾 (KI)36克溶解在 100ml 蒸馏水中，再加入碘(I)12.691克 溶解 2 稀释至 1000ml 贮于棕色瓶。 b 标定:用已标定的 0.05mol/L NaSO 溶液来标定碘溶液。 223 吸取 10ml 待标定的碘液放入 250ml 碘量瓶中，以 0.05mol/L NaSO 溶液滴定至 淡黄色时，223 加入 1%淀粉指示剂 2,3 滴，继续滴定至无色为终点。 湖北立业生物制品有限公司 文件类型 技术文件 批准人 余少文 Q/LYTM02-01-16 文件编号 实施日期 2006(10(1 糖化酶测定方法 2/3 执行部门 质控部 页码 c 计算: 0.05×消耗 NaSO 的ml 数 223 碘溶液的摩尔浓度= 10 1.1.3.4 氢氧化钠溶液 C(NaOH)=0.1mol/L 称取氢氧化钠 4g，用水溶解并定容至 1000ml。 1.1.3.5 200g/L 氢氧化钠溶液 称取氢氧化钠 20g，用水溶解并定容至 100ml。 1.1.3.6 硫酸溶液 C(1/2 HSO)=2mol/L 24 量取浓硫酸 (密度为 1.84)5.6ml，缓缓注入 80ml 水中，冷却后，定容至 100ml。 1.1.3.7 20g/L 可溶性淀粉溶液 称取可溶性淀粉 (以绝干计)2.000g，精确至 0.0001g，用水调成浆状物，在搅 动下缓缓倾入 70mL 沸水中，加热煮沸 2 分钟直至完全透明，冷却至室温，全部移 入 100mL 容量瓶，用水稀释至刻度线。此溶液必须当天配制。 1.1.3.8 10g/L 淀粉指示剂 将 20g/L 可溶性淀粉溶液稀释一倍。 1.1.4 仪器和设备 1.1.4.1 恒温水浴 40?0.2? 1.1.4.2 秒表 1.1.4.3 比色管50ml 1.1.5 分析步骤 1.1.5.1 待测酶液的制备 称取酶粉 1,2 克，精确至 0.002g(或吸取液体酶 1.00ml)，先用少量的乙酸钠 缓冲液溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾入