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糖化酶制剂测定方法 QBT1803-93
糖化酶测定方法
1/3 执行部门 质控部 页码
1. 试验方法 (除酶活力项目外,其它项目按 QB/T1803-93 标准执行) 1.1 酶活
力测定
1.1.1 定义
1ml 液体酶 (或 1g 固体酶粉),于 40?、PH4.6 的条件下,1 小时分解可溶性淀
粉产生 1mg 葡萄糖,即为一个酶活力单位,以 u/ml(u/g)表示。
1.1.2 原理
糖化酶有催化淀粉水解的作用,能从淀粉分子非还原性末端开始,分解 α,1.4
葡萄糖苷键生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基,能被次碘酸钠氧化,过量的次碘
酸钠,酸化后析出碘,再用硫代硫酸钠标准溶液滴定,计算出酶活力。
1.1.3 试剂和溶液
1.1.3.1 乙酸,乙酸钠缓冲溶液 (PH4.6)
称取乙酸钠 (CHCOONa?3HO)6.7g,溶于水中,加冰乙酸(CHCOOH)2.6ml,用水定
容 323
至 1000ml。配好后用PH 计校正。
1.1.3.2 硫代硫酸钠标准溶液 C(NaSO)=0.05mol/L 223
a 配制:称取硫代硫酸钠 (NaSO5HO)12.4克和碳酸钠 0.1 克溶于煮沸后冷却的蒸
溜 223.2
水中,定容至 1000ml,储于棕色瓶中密闭保存,配制后放置一星期标定使用。
b 标定:碘酸钾法
称取预先在 100,105?烘至恒重的分析纯碘酸钾 (KIO)3.567克,溶于 1000ml 蒸
馏水 3
中,即成0.1mol/L 碘酸钾溶液。然后吸取 10ml 于 150ml 三角瓶中,加入 0.5
克碘化钾(KI),溶解后加入 1mol/LHSO2ml,用待标定的 0.05mol/L NaSO 溶液来滴
定,滴至淡黄色时,24 223
加 1%淀粉指示剂 2,3 滴,继续滴定至无色为终点。
c 计算:
碘酸钾溶液的摩尔浓度×10
NaSO 溶液的摩尔浓度= —————————————— 223
消耗 NaSO 的ml 数 223
1.1.3.3 碘标准溶液
碘溶液 C(1/2 I)=0.1mol/L 2
a 配制:称取碘化钾 (KI)36克溶解在 100ml 蒸馏水中,再加入碘(I)12.691克
溶解 2 稀释至 1000ml 贮于棕色瓶。
b 标定:用已标定的 0.05mol/L NaSO 溶液来标定碘溶液。 223
吸取 10ml 待标定的碘液放入 250ml 碘量瓶中,以 0.05mol/L NaSO 溶液滴定至
淡黄色时,223 加入 1%淀粉指示剂 2,3 滴,继续滴定至无色为终点。
湖北立业生物制品有限公司 文件类型 技术文件 批准人 余少文
Q/LYTM02-01-16 文件编号 实施日期 2006(10(1
糖化酶测定方法
2/3 执行部门 质控部 页码
c 计算:
0.05×消耗 NaSO 的ml 数 223
碘溶液的摩尔浓度=
10
1.1.3.4 氢氧化钠溶液 C(NaOH)=0.1mol/L
称取氢氧化钠 4g,用水溶解并定容至 1000ml。
1.1.3.5 200g/L 氢氧化钠溶液
称取氢氧化钠 20g,用水溶解并定容至 100ml。
1.1.3.6 硫酸溶液 C(1/2 HSO)=2mol/L 24
量取浓硫酸 (密度为 1.84)5.6ml,缓缓注入 80ml 水中,冷却后,定容至
100ml。 1.1.3.7 20g/L 可溶性淀粉溶液
称取可溶性淀粉 (以绝干计)2.000g,精确至 0.0001g,用水调成浆状物,在搅
动下缓缓倾入 70mL 沸水中,加热煮沸 2 分钟直至完全透明,冷却至室温,全部移
入 100mL 容量瓶,用水稀释至刻度线。此溶液必须当天配制。
1.1.3.8 10g/L 淀粉指示剂
将 20g/L 可溶性淀粉溶液稀释一倍。
1.1.4 仪器和设备
1.1.4.1 恒温水浴 40?0.2?
1.1.4.2 秒表
1.1.4.3 比色管50ml
1.1.5 分析步骤
1.1.5.1 待测酶液的制备
称取酶粉 1,2 克,精确至 0.002g(或吸取液体酶 1.00ml),先用少量的乙酸钠
缓冲液溶解,并用玻璃搅拌棒捣研,将上清液小心倾入
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