基因结构与表达分析的基本策略教材.pptVIP

* Y=A（1+E）n Y: 扩增产物的量 A: 最初靶DNA分子数 E: PCR扩增效率 n: 循环次数 ? 3. PCR产量 当E＝100％, A=1时 Y=2n 2n(引物延伸产物的量） 第六十三页，共一百一十七页。 * （二）平台期与平台效应 1. 平台效应（plateau effect）： PCR经过一定数量的循环后，DNA片段不再呈指数累积，而是进入线性增长期或静止期，即平台效应。 影响因素： ① 引物及dNTP底物浓度降低。 ② 酶与模板比例下降。 第六十四页，共一百一十七页。 * PCR平台效应 第六十五页，共一百一十七页。 * （二）耐热DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶（实现了PCR自动化） 从嗜热水生菌thermus aquatics YT-1株中直接分离出来。 ● 95℃的半衰期: 40 min ● 最适温度: 72 ℃ ～80 ℃ ● 催化反应速率: 150～300核苷酸 / 秒/ 酶分子 第六十六页，共一百一十七页。 * 第六十七页，共一百一十七页。 * Taq DNA聚合酶特性： ● 5′→3′聚合酶活性； ● 5′→3′外切酶活性； ● 较弱的非模板依赖性；