实验直接抗人球蛋白实验.ppt

关于实验直接抗人球蛋白实验 第1页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 第一部分 直接抗人球蛋白试验原理 第2页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。 ——直接抗人球蛋白试验阳性 第3页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 致敏红细胞 抗人球蛋白 直接抗人球蛋白试验 第4页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 抗球蛋白试剂通常有三种： 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3进一步分析。 第5页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 直接抗人球蛋白试验临床意义 检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究 第6页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 第二部分 直接抗人球蛋白试验操作 第7页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？ 解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC) 第8页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS） 第9页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）： 1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min，分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份的压积红细胞各5滴混匀，备用； 2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min； 3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备用 第10页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏） 第11页，共16页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。按下表加入各反应物： 反应物 待检管 阴性对照 阳性对照 5％待检标本RBC 1 5％阴性对照RBC 1 5％阳性对照RBC 1 多特异性抗球蛋白试剂 1 1 1 受检者标本检测 第12页，共16页，2022年，5月20日，