抗体的纯化——沉淀法.docxVIP

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  • 2022-07-27 发布于四川
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抗体的纯化一沉淀法 抗体的纯化方法很多,最为常用的为以下四种方法基于工业化生产工艺 开发的规模化生产方法要比这些复杂得多,甚至多个纯化策略联合使用, 有兴趣的科研工作者可以查阅相关的文献。 1)沉淀法:利用抗体蛋白疏水性不同,提高盐离子浓度蛋白沉淀,常用 的沉淀方法有硫酸镀沉淀法、辛酸沉淀法、辛酸-硫酸锭沉淀法、优球 蛋白沉淀法和聚乙二醇沉淀法;这类纯化各有各的优缺点,往往对某些 亚型抗体有偏爱性。 2)广谱亲和纯化:这类纯化主要是利用金黄色葡萄球菌ProteinA/G蛋 白可以特异性与抗体的Fc结合的原理进行的。 3)抗原特异性纯化:将特异性的抗原偶联到琼脂糖凝胶等固相载体上, 纯化方法与ProteinA /G纯化方法相同。 4)离子交换法:DEAE-Sephadex A-50 (二乙氨基一乙基-葡萄糖凝胶 A-50 )为弱碱性阳离子交换剂。用NaOH将CI-型转变为0H-型后, 可吸附酸性蛋白。血清中的Y球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85? 7.5 ),其余均属酸性蛋白。pH7.2?7.4的环境中,酸性蛋白均被DEAE- Sephadex A-50吸附,只有丫球蛋白不被吸附。因此,通过柱层析,丫 球蛋白便可在洗脱中先流出,而其他蛋白则被吸附在柱上,从而便可分 离获得纯化的lgGo . (NH4)2SO4沉淀法纯化抗体 饱和硫酸镂配制:无菌去离子水加入足量硫酸镇之后,加热到

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