常规病理组织学和组织化学PPT课件.ppt

- 4. 灌注固定法 通过心血管途径将固定剂灌注到全身或某一器官，使生活的细胞在原位迅速固定后再取材，可达到非常好的固定效果，尤其对于脑等需要很长取材时间的器官更有意义。 麻醉或颈椎脱臼处死动物后，立即打开胸腹腔和心包，滴溜注射针刺入左心室或主动脉内，剪开右心耳排血，立即用含有适量肝素的生理盐水或缓冲液灌注，清洗血液；然后很快用固定液继续灌注，灌注量及灌注压应根据灌注血管不同而定，大小鼠心灌注时其压力约为100-150mmHg，灌流量约为5-10ml/min，灌注时间一般在5-20min左右，一般以观察动物肝质地变硬为准。 灌注固定完成后（也可用缓冲液继续灌注清除固定剂）取材，并可用固定液后固定2小时。 灌注固定快速均匀， 可保存细胞组织的微细结构，但必须掌握操作技术才可能达到固定目的。 三、水洗 用水道流水洗涤，目的是将组织块中的固定液取代出来，水洗一定要充分。 水洗时间数小时至24小时。 根据材料多少、大小可灵活掌握水洗工具，可用水洗筐或用纱布包裹，要防止水流大将组织块冲掉或丢失。 科研用小材料也可用PBS液多次浸泡洗涤，但要保证至少4-6小时的洗涤时间。 四、脱水 组织块固定后虽然已经硬化，但达不到切薄片的硬度，必须进行除固定液以外的其它处理，脱水就是继固定后的重要步骤。 经固定和水洗后的组织含大量水份，在这种情况下首先必须除去组织内部的水份，这种除水的过程叫做脱水，脱水使