基因工程-外源基因导入及转化子筛选鉴定PPT课件.ppt

2.5 重组DNA导入受体细胞;2.5.1 受体细胞;二、各种基因工程受体的特性;枯草杆菌;链霉菌;酵母菌;昆虫细胞（家蚕）;哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢细胞 CHO） ;植物细胞（拟南芥菜、烟叶） ;三、 实验室常用的基因工程受体;2.5.2 重组DNA导入受体细胞的途径;;;;（二）细菌原生质体的转化; 不同细菌的原生质体制备方法不尽相同，以链霉菌为例：细菌需生长在高渗培养基中（如34%的蔗糖溶液，并加入甘氨酸以增加细菌细胞壁对溶菌酶的敏感性。在制备过程中，菌体应始终悬浮在10.3%的蔗糖等渗溶液中。与原生质体接触的所有器皿应保持无水无去污剂 ; 取0.2 - 1ml的原生质体悬浮液（108-109个原生质体），加入10 - 20 ml DNA重组连接液，同时加入含有PEG1000和Ca2+的等渗溶液，混匀 ;（三）l噬菌体DNA的转染;（四）电穿孔转化;二、 转化率; 例如，pUC18对大肠杆菌的转化率为108，即每微克pUC18中只有108个分子能进入受体细胞。一微克pUC18共有3.4X1011个分子（6.02X1017 / 2686X660），也就是说，每3400个pUC18分子才有一个分子进入受体细胞 另一方面，在实际操作过程中，转化一微克pUC18共需2ml感受态细胞，大约含有2X1010个大肠杆菌细胞，也就是说，每200个细胞只有一个