基因芯片的操作流程及步骤.pptxVIP

第1页/共88页1 CELL =23 PAIRS OF CHROMOSOMES第2页/共88页 23 PAIRS OF CHROMOSOMES =~ 3,200,000,000 BASES第3页/共88页1 HUMAN BODY =100,000,000,000,000 CELLS第4页/共88页基因芯片结构示意图第5页/共88页第6页/共88页生物芯片的制作步骤 细胞对mRNA进行标记杂交基因表达资料第7页/共88页基因芯片研制的总体蓝图 研制方向的确定基因组序列分析与待检基因探针序列的确定检测样品 的制备检测设备的研制探针阵列的准备杂交检测与数据分析第8页/共88页基因芯片探针固相原位合成技术与照相平板印刷技术激光共聚焦显微技术于固定支持物上大量探针分子（通常每平方厘米点阵密度高于500）与被标记的样品分子进行杂交检测每个探针分子的杂交信号强度获取样品分子的数量和序列信息一次性对样品大量序列进行检测和分析，解决了传统核酸印迹杂交（Southern Blotting和Northern Blotting等）技术操作繁杂、自动化程序低、操作序列数量少、检测效率低等不足。简介第9页/共88页基因芯片是信息时代的产物横跨：生命科学、物理学、计算机科学、微电子技术光电技术、材料科学 等现代高科技。第10页/共88页4.我国主要研究单位中科院遗传所人类基因组中心北京大学联合基因集团有限公司我国第一家批量生产基因 芯片拥有近2千条基因药物发明专利东南大学吴健雄实验室中科院计算所生物信息学实验室上海生科院第11页/共88页我国基因芯片的研究现状目前，我国尚未有较成型的基因芯片问世，但据悉已有几家单位组织人力物力从事该技术的研制工作，并取得了一些可喜的进展。标志着我国相关学科与技术正在走向成熟。涉及领域：生命科学、计算机科学、精密机械科学第12页/共88页生物芯片分类根据用途还可以把生物芯片分为两类：信息生物芯片（information-biochip）和功能生物芯片（function-biochip）。第13页/共88页6400点的基因芯片 （面积 12X14 mm)第14页/共88页基因芯片（gene chip）的原理基因芯片的测序原理是杂交测序法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法。在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置 ，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶序列的核酸。第15页/共88页基因芯片又称DNA微阵列（DNAmicroarray）三种主要类型：1）固定在聚合物基片（尼龙膜、硝酸纤维膜等）表面上的核酸探针或cDNA片段——通过同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测2）用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列——通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测3）在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列——与荧光标记的靶基因杂交进行检测把大量分子检测单元集成在一个微小的固体基片表面，可同时对大量的核酸和蛋白质等生物分子实现高效、快速、低成本的检测和分析。基因芯片原型第16页/共88页主要类型多种方法将寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上原位合成（in situ synthesis）合成点样支持物：玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等薄膜型、玻片型微板型集成电路型第17页/共88页 基因芯片 /DNA 微阵列Gene Chip /DNA Microarray第18页/共88页第二节、基因芯片技术核酸杂交技术是基因芯片应用的基础。第19页/共88页核酸体外杂交技术第20页/共88页 表达型基因芯片的设计第21页/共88页一、基因芯片（DNA微阵列） 寡核苷酸芯片、cDNA芯片、Genomic芯片 模式一：是将靶DNA固定于支持物上，适 合于大量不同靶DNA的分析， 模式二：将大量探针分子固定于支持物上， 适合对同一靶DNA进行不同探针序列的分 析。 第22页/共88页1.基因芯片原理 基因芯片是在基因探针的基础上研制出的。它将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进行分析。基因芯片把大量分子检测单元集成在一个微小的固体基片表面，可同时对大量的核酸和蛋白质等生物分子实现高效、快速、低成本的检测和分析。 基因芯片技术是建立在Southern blot基础之上的，可以说它是Southern blot的改进和发展，它的原理是：变性DNA 加入探针后在一定温度下退火，同源片段之间通过碱基互补形成双链杂交分子。第23页/共88页2.基因芯片的基本原理分析任何线状的单链DNA或RNA序列均可被分解为一个序列固定、错