青贮饲料中乳酸菌菌种的分离与保藏技术规程.pdfVIP

ICS 65.020.01 CCS B25 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2690—2022 青贮饲料中乳酸菌菌种的分离与保藏 技术规程 Technical protocol for isolation and preservation of lactic acid bacteria strains in silage 2022-07-15 发布 2022-08-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古农业大学提出。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业科学院、中国农业科学院草原研究所、白 城师范学院、巴林左旗林业和草原局、内蒙古伊禾绿锦农业发展有限公司。 本文件主要起草人：格根图、包健、贾玉山、王志军、孙林、尤思涵、都帅、降晓伟、侯美玲、丁 霞、卢强、马千鹏、王瑞峰、赵牧其尔、李宇宇、刘明健、王宇、张佳伟。 青贮饲料中乳酸菌菌种的分离与保藏技术规程 1 范围 本文件规定了青贮饲料中乳酸菌菌种分离与保藏的基本原则、设备、试剂、菌种分离、菌种保藏方 法。 本文件适用于青贮饲料中乳酸菌菌种的分离与保藏。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 20287 农用微生物菌剂 SN/T 1538.1 培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 基本原则 应针对菌种的生物学性状选择分离与保藏方法。 应使分离和保藏的菌种不染杂菌，使退化和死亡降到最低限度。 应保证菌种分离和保藏的安全性，不能对周围环境造成污染和危害。 5 设备 恒温培养箱：5 ℃～60 ℃。 厌氧培养装置：5 ℃～60 ℃。 振荡器：往复式。 冰箱：4 ℃冰箱、超低温冰箱（-50 ℃～-86 ℃）。 分析天平：感量0.001 g。 光学显微镜：4×～100×。 均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。 水浴锅：0 ℃～100 ℃。 超净工作台。 6 试剂 乳酸菌培养基：MRS 琼脂，见附录A。 稀释液：称取氯化钠8.5 g，溶于1000 mL 蒸馏水中，分装后，121 ℃高压灭菌30 min。 所用试剂均为分析纯，水符合GB/T 6682 三级水规格。 7 乳酸菌菌种分离 菌液制备 以无菌操作称取10 g样品置于盛有90 mL无菌生理盐水的聚乙烯均质袋内，用拍打式无菌均质器拍 打2 min，制成1：10的样品菌液。 菌液稀释 用1 mL 无菌吸管（移液枪）吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于装有9 mL 无菌水的无菌试管 1 中，振摇试管或利用小型试管振荡器使其混合均匀，按1→10进行系列稀释，分别得到1→1×10 、1→1 2 3 4 5 ×10 、1→1×10 、1→1×10 ，