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第1页/共27页上节知识点回顾抗植物病毒基因工程中常用的技术路线。CP基因抗病毒的原理。病毒卫星RNA。缺陷干扰颗粒。第2页/共27页1. 植物抗真菌病害基因植物防卫反应： 增强细胞壁结构： 富含羟脯氨酸糖蛋白和富含甘氨酸蛋白；木质素 诱导产生或激活抗菌物质： 硫堇，植物抗毒素，几丁质酶，PR蛋白小麦锈病 梨黑星病第3页/共27页1.1 几丁质酶基因几丁质酶抑菌机制 植物病原真菌的细胞壁主要成分之一是几丁质，几丁质酶通过破坏菌丝尖端新合成的几丁质而抑制病原菌的生长。病原真菌细胞壁中几丁质的降解不仅破坏细胞新物质的沉积，使病原体死亡，而且产生的细胞壁碎片可以刺激寄主植物产生抗病反应。 几丁质酶属于PR蛋白，在植物中含量低，受病原菌诱导，没有病原特异性，是由宿主的反应类型决定的，在进化上相对保守。第4页/共27页几丁质酶的利用策略直接应用，将酶直接施与农田，以保护植物免受土壤真菌的侵染将几丁质酶基因引入根围细菌，使该工程菌表达分泌几丁质酶将基因导入植物，使转基因植物表达几丁质酶。 现在已经对许多微生物和植物的几丁质酶基因进行了分离，克隆，测序和转化，转基因植株中几丁质酶增加，抗病性增加。第5页/共27页1.2 植物抗毒素基因 植物抗毒素：亦称植保素，是植物受侵染后产生的一类低分子抗菌化合物，具有种属特异性。 现已鉴定的植保素达200多种，以类黄酮与类萜类植保素研究最多。植保素的产生速度、累积含量与植物的抗病性有着密切的关系。第6页/共27页1.3过氧化物酶基因苯丙烷代谢是一条和多种生理功能密切相关的代谢途径。该途径的产物在植物抗病反应中起着重要作用。（预防性抗菌物质、诱导性抗病物质、防御屏障） 过氧化物酶催化苯基类丙烷醇脱氢聚合最终形成木质素，将该酶的编码基因和35s启动子连接转入烟草，显著提高了烟草对霜霉病的抗性。第7页/共27页1.4 SAR抗病基因SAR概念：系统获得抗病系统，由病原侵染激发，可持续及对随后同种病原体甚至不同种的其他病原体的侵染均能表现出系统性的抗病性。水杨酸（SA）：一种信号分子，SA介导植物保护反应是由于一组复杂的植物保护机制被SA激活所致。（足够的SA含量+有效的信号感知和转导途径）。过氧化氢酶：在病原菌与寄主识别反应的早期就会积累的过氧化氢酶是SA的结合蛋白，该酶基因的过表达能够增加马铃薯抵抗病原菌的能力。第8页/共27页2. 抗植物细菌病害基因全世界马铃薯每年因细菌病害减产25%，约40亿美元。 1845-1860年马铃薯晚疫病导致爱尔兰饥荒。 1970年玉米大斑病再次引起全球惊慌。第9页/共27页2.1 病原菌自身的抗性基因 原理：将病原菌基因导入植物细胞，使其过量表达，或表达失去原有功能的蛋白，或表达失去原有的时空性，从而干扰病原菌的正常生理代谢，以致寄主植物表现出抗性。 菜豆毒素是菜豆假单胞菌中重要的治病因子，作用机制是抑制植物鸟氨酸氨甲酰基转移酶（OCTase）的活性。菌体本身存在抗菜豆毒素的OCTase，将编码该酶的基因导入烟草后，获得的烟草转基因植株在接种菜豆毒素后不表现系统病症。第10页/共27页转黄瓜抗青枯病基因的甜椒转黄瓜抗青枯病基因的马铃薯第11页/共27页2.2 溶菌酶基因及其应用溶菌酶（lysozyme）存在于卵清、唾液等生物分泌液中，催化细菌细胞壁肽聚糖N-乙酰氨基葡糖与N-乙酰胞壁酸之间的1，4-β-糖苷键水解的酶。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。 第12页/共27页3.抗非生物胁迫基因苏铁冻害 胁迫：指对植物生存和生长不利的各种环境因素的总和。分为生物胁迫和非生物胁迫。温度水辐射化学因素风、雨、雪、声、磁、电涝 干旱低温 高温红外光可见光紫外光离子辐射盐类、离子、气体、除草剂等冷害 冻害第13页/共27页3.1 耐除草剂基因农田杂草丛生香蕉除草剂药害限制除草剂应用的重要因素：除草剂药害农田杂草丛生玉米除草剂药害第14页/共27页 主要为转基因大豆、玉米、棉花、油菜，5860万hm2，约占全世界转基因作物的72%第15页/共27页解决除草剂对农作物伤害的途径（一）应用对农作物伤害小的除草剂（二 ）育种 1.杂交育种：将野草植物的除草剂的抗性引入栽培品种中； 2.遗传工程育种：组培或细胞培养结合理化诱变 基因工程手段耐除草剂基因工程策略：靶蛋白改造；引入酶系统第16页/共27页EPSPS过量表达EPSPS靶蛋白突变3.1.1靶蛋白抗性基因及其应用（1）抗EPSPS抑制剂基因及其应用EPSPS：草甘膦（glyphosate）是一种施用于叶片的广谱、非选择性的有机磷类除草剂。草甘膦特异性地抑制植物和细菌中5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）的活性。EPSPS是芳香族氨基酸合成途径中的一个酶，对植物正常发育起着重要作用。第17页/共27页3.1.