蛋白表达纯化.pptVIP

重组蛋白质在大肠杆菌中的表达和纯化;研究目的： 生物学活性 纯度 数量 目的蛋白性质： 序列 相对分子质量 氨基酸组成 等电点 稳定性 亲水性;大肠杆菌表达系统 遗传背景清楚，基因工程操作方便，商品化表达载体种类齐全，表达效率高 根本不分泌，容易形成包涵体，无糖基化等翻译后修饰 真核表达系统 可进行分泌表达，有天然立体结构及翻译后修饰 表达量较低，培养本钱较高，操作较复杂 表达系统选择：目的蛋白性质，研究目的;大肠杆菌表达形式 可溶性表达：目的蛋白???有二硫键且需要正确的立体结构 包涵体表达：无活性要求，温度和诱导剂浓度影响 融合表达：小分子蛋白 大肠杆菌表达载体 融合表达：融合各种tag，GST,CBD,GFP等 单纯表达：pJLA系列，用NcoI/NdeI导入AUG的载体 NdeI 识别序列： 5 CA^TATG 3 IPTG诱导：lac，T5，T7启动子 热诱导：lamda phage PL和PR启动子 表达载体选择：研究目的，目的蛋白性质和预计纯化方法;5;重组蛋白质在大肠杆菌中的表达和纯化 步骤1. 目标基因全基因合成 步骤2. 目标基因亚克隆 步骤3. E. coli 表达菌株转化及筛选 步骤4. 目标蛋白表达及纯化;步骤1. 目标基因全基因合成： 1.从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。 2.根据选用的表达系统对cDNA进行密码子，mRNA二级结构等的优