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2黔东南州疾控中心02X结核菌素皮肤试验操作指南州疾控中心 概述：结核菌素：由人工培养的结核杆菌的培养滤液制成的一种生物制品，其有效成份为结核蛋白。结核菌素试验：又称PPD试验，是指通过皮内注射结核菌素，并根据注射部位的皮肤状况诊断结核杆菌感染所致IV型超敏反应的皮内试验。结核菌素的历史：1890年首先公布发现结核菌素。该年4月4日罗伯特·柯赫在第10届世界医学会上演讲发表发现一种可以预防豚鼠结核病，并有治疗作用的物质。1891年柯赫明确这种液体是结核菌的培养滤液，并命名为结核菌素。1908年发现结核菌素试验方法（C.Mantoux）。1928年美国P.B.Seibert(塞伯特）从结核菌培养液中制成了一种纯蛋白衍生物结核菌素（PPD）。1941年美国研制成功一种标准纯蛋白衍生物结核菌素（PPD-S）。1958年丹麦研制成了更纯、更浓的纯蛋白衍生物结核菌素（PPD-RT23），为WHO推荐制剂。结核菌素种类：1、旧结核菌素（Old Tuberculin OT)：是从生长结核菌的液体培养基中提炼出来的结核菌代谢产物。它由结核菌的菌体全部和培养基等成分构成，主要有：（1）菌体蛋白、多糖、核酸、脂类；（2）菌体代谢产物；（3）培养基成分。试验中易产生非特异性反应。2、结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）：结核菌素纯蛋白衍生物，它是将旧结素过滤后，再用硫酸胺等加以沉淀而获得的纯度较高的结核杆菌分泌蛋白质。其制作过程：菌株→培养→灭菌、滤过 →浓缩 →盐析、脱盐 →干燥、保存→分装。我国从人型结核菌制成PPD（PPD-C），又从卡介苗制成卡介苗纯蛋白衍生物（BCG-PPD），0.1ml为5IU用于临床诊断，应用中特异性反应更加敏感和准确。结核菌素种类：OT和PPT的差异在于它们的成分不同。OT中除了含结核蛋白外，还有一些非活性成分，而PPD中结核蛋白的纯度更高。并且OT因生产批号不同变异显著，而PPD的生产为统一标准。OT效价不稳定，PPD效价十分稳定，易于标准化。OT成份复杂，非特异性成分抗原性广，能引起非特异性反应，呈现红晕，红晕大于硬结，边缘欠整齐，硬结不易准确测量；而PPD则无此缺点，具有更高的特异性。在反应敏感性上PPD也显著优于OT，红晕与硬结大小基本一致。OT 80年代前使用，现已不使用；PPD从90年代至今一直在使用。纯蛋白衍生物（PPD） 1.人型结核杆菌制成PPD（PPD-C） 经液体表面培养、蒸汽杀菌、过滤除去菌体后，用沉淀、分离、洗涤及再溶解等提纯方法之称的活性物质，其主要成分是蛋白质，对已受结核菌感染或曾接受卡介苗疫苗的机体，能引起特异的皮肤变态反应，用于检查结核杆菌的感染及观察机体免疫反应。（特异性反应强、非典型结核对型反应、强阳性反应较强）纯蛋白衍生物（PPD）2.卡介苗纯蛋白衍生物（BCG-PPD）— 减毒牛型结核杆菌（BCG）制成 培养滤液中提取的一种具有免疫反应原活性的物质，可引起卡介苗免疫接种者和对型结核杆菌感染者的皮肤反应。保存本品为已稀释制品，于2～8℃保存，效期为1年。结核菌素作用范围结核分枝杆菌感染率调查肺结核患者密切接触者筛查结核病的辅助诊断特殊人群的健康体检卡介苗接种对象的选择卡介苗接种后机体免疫反应的检测结核菌素试验原理结核菌素皮肤反应是迟发型细胞超敏反应（Ⅳ型变态反应）。它是抗原（结核菌或卡介苗）进入机体使机体的免疫T淋巴细胞致敏，并大量分化增殖。当已致敏的机体再次遭受到抗原入侵时，致敏淋巴细胞就会与之结合，引起变态反应性炎症。表现在结核菌素注射部位形成硬结甚至发生水疱、坏死。结核菌素试验阳性表明机体曾经受到结核菌感染或接种过卡介苗，也表示机体对结核菌有一定的免疫力。但也有少数免疫力低下的人（约5%）呈阴性或因技术原因而呈现出假阴性。通常接种卡介苗后，若PPD皮试阴性，说明接种失败。结核菌素试验方法 结核菌素皮肤试验的方法为皮内注射法，这是国际通用的标准结核菌素皮肤试验方法。该方法反应比较敏感，注射剂量准确。操作方法操作前准备1、物品准备（1）测量卡尺或小塑料尺（2）标记硬结边缘的笔（3）1毫升一次性蓝色针芯注射器，4——5号针头（4）75%消毒酒精及消毒棉签（5）结核菌素试剂（6）结核菌素试验医嘱记录单操作方法2、操作者准备操作者洗手并戴上口罩；核对结核菌素试剂品名，剂量及有效期；确认试验者信息，向试验者解释进行结核菌素皮肤试验的目的；询问试验者以前是否做过该试验，如做过应问清时间、部位，以免引起促进反应，同时了解是否存在接种禁忌症；应在室内进行注射，避免日光直接照射；操作前注意事项安瓿有裂痕、制品内有异物不得使用；安瓿打开30分钟未用完应该废弃；结核菌素试剂应于2——8℃避光保存及运输；注射器及针头应当专用，不可作其它注射之用。操作步骤1、注射部位选择：位于左前臂掌侧中下1/3交