DNA测序分析常见问题整理演示文稿.pptVIP

DNA测序分析常见问题整理演示文稿 当前1页，共30页，星期一。 测序结果—峰图 四色图谱：每一种颜色对应一种碱基 A T C G 当前2页，共30页，星期一。 引物 DNA模板 纯化 困难模板 机器影响 影响测序质量的主要因素 当前3页，共30页，星期一。 一、引物对测序结果的影响 ① 引物合成时多（少）一个碱基 ② 引物不纯 ③ 模板上没有引物结合位点 ④ 引物二聚体 ⑤ 双引物结合 当前4页，共30页，星期一。 合成时部分引物 多一个碱基 合成时部分引物 少一个碱基 ● 现象：每个峰后面有个同样荧光信 号的小“尾巴”。 ● 原因：合成时引物多一个碱基。 ● 对策：重新合成引物 ● 现象：每个峰前面有个同样荧光信 号的小“尾巴”。 ● 原因：合成时引物多一个碱基。 ● 对策：重新合成引物 当前5页，共30页，星期一。 引物（模板）不纯 ● 现象：整个峰图噪音都比较高。（区别与小片段的干扰） ● 原因：引物（模板）纯度太低，含有较多杂质 ● 对策： –建议使用HPLC（柱子纯化）或PAGE 纯化的测序引物。 –脱盐纯化的引物纯度较低，适合做普通PCR，但不建议用来测序。 当前6页，共30页，星期一。 模板上没有引物结合位点 ● 现象：没有特异性的测序峰图 ● 原因：引物无法结合模板 ● 对策 重新设计引物 当前7页，共30页，星