细菌内毒素检测 9、常见干扰及消除.pdfVIP

常见干扰及消除 湛江安度斯生物有限公司 2016年7月 实验助手APP授权发布 BET干扰的普遍性！ 70% ！ • 一项对人用药品与鲎试验相容性的研究证实 了干扰的影响范围，在所研究的品种中仅 30%的药品可以不经任何处理直接进行BET ； 有97%的干扰问题可以通过稀释供试品的方 法去消除。 2 干扰的表现 • 凝胶法 ChP （2015年）规定无干扰条件： 当溶液A和溶液D的所有平行管都为阴性，并 且系列溶液C的结果符合鲎试剂灵敏度复核试验 要求时，试验方为有效。 当系列溶液B的结果符合鲎试剂灵敏度复核试 验要求时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。 3 干扰的类型 • 抑制 – 供试品含有的内毒素浓度≥2倍检测试剂的灵敏 度，但检测结果仍为阴性，称之为假阴性。 • 增强 – 供试品含有的内毒素浓度低于检测试剂灵敏度 的1/2 ，但检测结果仍为阳性，称之为假阳性。 4 光度法的判断？ 无干扰可接受范围：50%≤回收率≤200% 抑制：回收率＜50% 增强：回收率＞200% 无干扰 抑制 增强 50% 200% 干扰的判断：回收率=？% 5 干扰的因素！ pH值 聚集 脂质体  二价阳离子 浓度不足 鲎试剂 内毒素 吸附 高渗透压 酶、酶抑制剂 洗涤剂 LAL-RM 表面活性剂 6 pH值的影响 鲎试剂中的酶需要在pH值6~8的范围内才能正常反 应，极端的pH环境影响酶的活性，造成抑制 一般来说鲎试剂配方中都添加了缓冲剂以帮助样品的 pH值的调节，但这不足以解决所有样品的pH问题 测定以1:1为比例混合的样品稀释液+鲎试剂的pH值 以获得准确的pH值 7 解决有关pH的问题 •用BET水对供试品在允许的范围内进行稀释 1 •用缓冲液制备供试品 2 •用酸、碱或缓冲液来调节pH 3 8 二价阳离子浓度不足 2+ 2+ Mg 离子是鲎试剂重要的辅因子，没有Mg 离子，内毒素 将无法激活鲎试剂的酶。 供试品中的螯合剂成分会螯合试剂中的二价阳离子（如Mg2+ 离子），造成抑制 常见的螯合剂有：EDTA、柠檬酸钠、肝素钠、喹