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一株产木聚糖酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化 　　摘要从土壤中筛选出一株高产木聚糖酶的菌株zk2，结合形态学以及16srdna序列同源性分析对菌株进行鉴定，并对菌株的产酶条件进行优化。结果表明，菌株与枯草芽孢杆菌的相似度最高，在温度38℃、初始ph8.0、发酵时间54h、接种量10%时，菌株的产酶条件最优。 　　关键词木聚糖酶；枯草芽孢杆菌；筛选；发酵条件 　　中图分类号q814.1文献标识码a 　　文章编号0517-6611（2019）08-0168-03 　　doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.08.044 　　abstractastrainzk2withproducingxylanaseabilitywasisolatedfromthesoilinwuhan，hubeiprovince.strainzk2wasidentifiedbasedonphysiologicalandsequencehomologyanalysisof16srdnasequence.singlefactorexperimentssuchastemperature，initialph，fermentationperiod，inoculumsize，werepreliminarilyoptimized.theresultsshowedthatthestrainhadhighsimilaritytothesequenceofbacillussubtilis.theoptimumconditionsforxylanaseproductionwereasfollows：theoptimalfermentationtemperatureof38℃，initialphof8.0，fermentationperiodof54h，inoculumsizeof10%. 　　keywordsxylanase；bacillussubtilis；screening；fermentationconditions 　　木聚糖（xylan）为多聚五碳糖，是主要存在于植物细胞壁中的半纤维素成分，也是除纤维素外自然界中含量最丰富的可再生多糖[1-2]。木聚糖虽然广泛存在于植物体内，但动物基本不能消化吸收。木聚糖酶（dxylanxylanohydrolaseec3.2.1.8）是一类木聚糖降解酶系，属于水解酶类[3]。木聚糖的完全降解需要木聚糖水解酶系中各种酶相互之间协同完成，其中木聚糖酶（β-1，4-d-xylanase）是最关键的水解酶，以内切方式作用于木聚糖主链内部的β-1，4-木糖苷键，其主要水解产物为低聚木糖和少量木糖[4]，为木聚糖的进一步应用起着极为重要的作用。 　　木聚糖酶具有重要的应用价值，在饲料[5]、造纸[6]、食品和医药[2-3]等行业均有广泛的应用。因此，对木聚糖酶的开发研究具有极大的商业价值。木聚糖酶主要来源于真菌、细菌、藻类和原生动物[7-9]，当前绝大多数商用木聚糖酶来源于真菌，主要由于真菌的产酶量相对较高。但真菌发酵周期长，且大部分真菌木聚糖酶最适作用条件偏于中性，使其在造纸、饲料、食品等工业极端环境下应用受到一定限制[10]，而细菌木聚糖酶在耐极端条件方面有较强的优势[10-13]，因此，从自然界中筛选细菌源的木聚糖酶仍具有极其重要的意义。 　　1材料与方法 　　1.1材料与仪器土样采自湖北省武汉市汤逊湖旁。酵母浸粉、蛋白胨、磷酸氢二钾、氯化钠、硫酸镁、硝酸铵，均为分析纯，购自国药集团有限公司，木聚糖购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，琼脂购于biosharp，japan。 　　bxm-30r立式压力蒸汽灭菌器、jy600dna电泳仪、hh-s6恒温水浴锅、ohg-914385-iii电热恒温鼓风干燥箱、tg16-ws台式高速离心机、sw-cj-zg超净工作台、bio-radmycyclerpcr仪、spx-250b-d全温振蕩培养箱、722型紫外可见分光光度计。 　　1.2培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基：牛肉膏0.50%、蛋白胨1.00%、氯化钠0.50%、ph7。 　　选择培养基：榉树木聚糖0.50%、硝酸铵0.30%、酵母浸粉0.40%、氯化钠0.50%、磷酸氢二钾0.20%、硫酸镁0.02%、琼脂2.00%、ph7。发酵培养基：玉米芯粉3.00%、蛋白胨0.50%、磷酸氢二钾0.50%、ph7。 　　1.3产木聚糖酶菌株的分离与筛选 　　取100ml蒸馏水加入装有玻璃珠的250ml锥形瓶中，高压灭菌，将1g土样加入锥形瓶中，振荡30min，按10倍稀释法进行稀释，取土样稀释液10-4、1