DB12_T409-2009蛋与蛋制品中抗生素残留检验方法微生物法.docxVIP

ICS 67.050 ICS 67.050 X 04 备案号： 天 津 市 地 方 标 准 DB12/T 409—2009 蛋与蛋制品中抗生素残留检验方法 微生物法 Examination of residue of antibiotics in eggs and egg products Microbiological method 2009-05-21发 布2009-05-21 2009-05-21发 布 天 津 市 质 量 技 术 监 督 局 发 布 I DB12/T 409—2009 前 言 本标准的附录A、附录B为规范性附录。 本标准由天津市产品质量监督检测技术研究院、太阳食品(天津)有限公司提出。 本标准由天津市产品质量监督检测技术研究院负责解释。 本标准由天津市质量技术监督局批准。 本标准起草单位： 天津市产品质量监督检测技术研究院、太阳食品(天津)有限公司。 本标准主要起草人：张洁、汪晓冬、高亦军、陈相富、赵用花、刘顺荣。 本标准首次发布。 1 DB12/T 409—2009 蛋与蛋制品中抗生素残留检验方法 微生物法 1 范围 本标准规定了蛋与蛋制品中抗生素残留检验的制样及微生物抑制检验方法。 本标准适用于蛋(蛋黄部分)与蛋制品(蛋黄制品)中抗生素残留筛选检验。 本标准不适用于蛋(蛋黄部分)与蛋制品(蛋黄制品)中抗生素残留量的定量测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 本方法根据抗生素对敏感菌的抑制作用，通过抑菌圈来判定是否含有抗生素。 4 仪器和设备 4.1 恒温培养箱： 30℃±1℃。 4.2 离心机：1000r/min~4000 r/min。 4.3 恒温水浴锅。 4. 4 涡旋振荡器。 4.5 生物显微镜。 4.6 游标卡尺： 测量范围0mm~200mm,精度0.02mm,i或抑菌圈测量仪。 4.7 平皿： 直径(86±1)mm,底部平整光滑，经灭菌。 4.8 圆形滤纸片： 直径10mm,厚度1.1mm。日本Toyo Roshi Kaisha,Ltd.产品或性能等同的产品。 4.9 定性滤纸。 4.10 高压灭菌器。 4.11 分析天平： 感量0.1mg。 4.12 冰箱： 0℃~8℃。 4.13pH 计： 感量0.1。 4.14 天平： 0.1g。 4.15移液器： 1000μL。 4.16克氏瓶。 5 材料和试剂 5.1.1 藤黄微球菌Micrococcus 5.1.1 藤黄微球菌Micrococcus luteus ATCC9341,菌种的保存见附录A。 5.1.3 蜡样芽胞杆菌蕈状变种Bacillus cereus Var.mycoides ATCc11778,菌种的保存见附录A 5.1.3 蜡样芽胞杆菌蕈状变种Bacillus cereus Var.mycoides ATCc11778,菌种的保存见附录A。 2 DB12/T 409—2009 5.2 培养基 5.2.1 保存及传代用细菌培养基： 普通营养琼脂。 5.2.2 增殖用液体培养基： 普通营养肉汤。 5.2.3 检测用培养基：抗生素培养基5号(AM5)、抗生素培养基8号(AM8)(配方见附录B)。 5.3 试剂 本方法所用化学试剂为分析纯;试验用水为蒸馏水、去离子水，试验用水应符合GB/T6682的规定。 5.3.1 缓冲液 5.3.1.1 柠檬酸-丙酮缓冲液 a)0.2mol/L|柠檬酸溶液： 称取柠檬酸(CHaO?)4.2g溶解在100mL蒸馏水中; b)0.5mol/L|氢氧化钾溶液： 称取氢氧化钾(KOH)2.8g溶解在100mL蒸馏水中; c)混合液： 0.2mol/L 柠檬酸溶液和0.5mol/L 氢氧化钾溶液等量混合; d)柠檬酸—丙酮缓冲液体积比： 混合液+丙酮+蒸馏水=35+35+30。 5.3.1.2 pH4.5磷酸缓冲液：称取13.60g磷酸二氢钾(KHPO.)溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压 灭菌15min。 5.3.1.3 pH6.0磷酸缓冲液：称取8.00g磷酸二氢钾(KHPO)及2.00g磷酸氢二钾(KHPO,)溶解于 1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌 15min。 5.3.1.4 pH 8.0磷酸缓冲液：称取0.52g磷酸二氢钾(KH?PO4)及16.73g磷酸氢二钾(KHPO)溶解 于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15mi