中药化学成分提取分离方法中国中医科学院中药所边宝林.pptVIP

㈢ 根据物质的吸附性差别进行分离 在天然有机化合物分离及精制工作中，吸附现象利用得十分广泛。其中又以固-液吸附用得最多，其分： 物理吸附(表面吸附，physical adsorption)：以硅胶、氧化铝及活性炭为吸附剂 化学吸附（chemical adsorption） 半化学吸附（semichemical adsorption）：聚酰胺层析 第三十一页，共七十页。 1、物理吸附 液-固物理吸附色谱是运用较多的一种方法，特别适用于很多中等分子量的样品（分子量小于1，000的低挥发性样品）的分离，尤其是脂溶性成分。一般不适用于高分子量样品如蛋白质、多糖或离子型亲水性化合物等的分离。 吸附层析的分离效果，决定于吸附剂、溶剂和被分离化合物的性质这三个因素。 第三十二页，共七十页。 ⑴ 吸附剂 ① 硅胶 ② 氧化铝 活性炭 第三十三页，共七十页。 吸附剂的特点 硅胶和氧化铝为极性吸附剂，有以下特点： ① 对极性物质具有较强的亲和能力。故同为溶质，极性强者将被优先吸附。 ② 溶剂极性越弱，则吸附剂对溶质将表现出越强的吸附能力。溶剂极性增强，则吸附剂对溶质的吸附能力即随之减弱。 ③ 溶质即使被硅胶、氧化铝吸附，但一旦加入极性较强的溶剂时，又可被后者置换洗脱下来。 第三十四页，共七十页。 吸附剂的特点 活性炭因为是非极性吸附剂，故与硅胶、氧化铝相反，对非极性物质具有较强的亲和能力，在水中对该类物质表现出强的吸附能力。 溶剂极性降低，则活性炭对该类物质的吸附能力也随之降低。故从活性炭上洗脱被吸附物质时，洗脱溶剂的洗脱能力将随溶剂极性的减弱而增强。 第三十五页，共七十页。 ⑵ 溶剂 洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑。在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。 第三十六页，共七十页。 ⑶ 被分离物质的性质 被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素，彼此紧密相连。在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分离情况，直接与被分离物质的结构与性质有关。对极性吸附剂而言，成分的极性大，吸附性强。 第三十七页，共七十页。 2、吸附薄层色谱 薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时，即称薄层层析。（硅胶、聚酰胺等） 针对某些性质特殊的化合物的分离与检出，有时需采用一些特殊薄层。 第三十八页，共七十页。 特殊薄层 ① 荧光薄层 ② 络合薄层 ③ 酸碱薄层和PH缓冲薄层 第三十九页，共七十页。 薄层层析法应用 ① 化学成分的预试 ② 化学成分的鉴定 ③ 探索柱层分离的条件 第四十页，共七十页。 3、吸附柱色谱（柱层析） ⑴ 吸附剂的用量 一般为样品量的30～60倍。样品极性较小、难以分离者，吸附剂用量可适当提高到样品量的100～200倍。据此可选择适当规格的色谱管，实验室中常用色谱管的规格如下所示，其高度与直径比（h/d）约为（15∶1）～（20：1）。 柱色谱用的硅胶及氧化铝通常以100～200目或200 ～300目为宜，或甚至直接采用薄层色谱用规格，其分离效果可以大大提高。 第四十一页，共七十页。 3、吸附柱色谱 ⑵ 洗脱剂的选择，以TLC摸索洗脱条件装柱，湿法装柱（以起始洗脱剂拌匀装柱）或干法装柱。 第四十二页，共七十页。 3、吸附柱色谱 （3）样品的预处理 能直接溶于洗脱剂的样品用适量洗脱剂溶解样品，尽可能少，以利样品在吸附剂柱上形成狭窄的原始谱带。 不能溶解于洗脱剂的样品，则将用能使之溶解的溶剂溶解后，再用少量吸附剂拌匀，并减压抽干溶剂或在60℃下加热挥尽溶剂，置真空干燥器中减压干燥或直接减压抽干、研粉后再小心铺在吸附剂柱上。 第四十三页，共七十页。 3、吸附柱色谱 （4）洗脱用溶剂的极性宜逐步增加，跳跃不能太大。 实践中多用混合溶剂，并通过巧妙调节比例以改变极性，达到梯度洗脱分离物质的目的。一般混合溶剂中强极性溶剂的影响比较突出，故不可随意将极性差别很大的两种溶剂组合在一起使用。 第四十四页，共七十页。 3、吸附柱色谱 （5）为避免发生化学吸附，酸性物质宜用硅胶、碱性物质则宜用氧化铝进行分离。 硅胶、氧化铝用适当方法处理成中性时，情况会有所缓解。通常在分离酸性（或碱性）物质时，洗脱溶剂中分别加入适量醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），常可收到防止拖尾、促进分离的效果。 第四十五页，共七十页。 4、聚酰胺吸附色谱法