蛋白质免疫印迹技术.pptVIP

HRP常用的生色底物有： DAB—二氨基联苯胺 TMB—四甲基联苯胺 OPD—邻苯二胺 一般免疫印迹中，显色反应采用生成不溶性产物的底物DAB。 佐剂主要可分为两种：一种本身具有免疫原性，如百日咳杆菌、抗酸杆菌（结核分枝杆菌）以及革兰阴性杆菌等；另一种本身无免疫原性，如氢氧化铝、磷酸钙、矿物油乳剂、表面活性剂等。 目前实践中常应用的佐剂福氏佐剂。 福氏佐剂（Freund?adjuvant）, 通常是由羊毛脂1份、石腊油5份。这是不完全福氏佐剂。 在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全佐剂。 （六）免疫方法 抗原剂量，首次剂量为10～50μg，加强免疫的剂量约为首次剂量的1/4。 首次免疫时抗原与完全佐剂等体积混合。加强免疫时用不完全佐剂。 每2～3周加强免疫一次。 在第2次加强免疫后2周，从耳缘静脉取2～3mL血，制备血清，检测抗体效价。如未达到预期效价，需再进行加强免疫，直到满意时为止。当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。 抗体的产生顺序与丰度 （七）抗血清的采集与保存 取兔血有两种方法，一是耳缘静脉或耳动脉放血，一是颈动脉放血，也可心脏采血。 小鼠取血。 收集的血液置于室温下1h左右，凝固后，置4℃下，过夜（切勿冰冻）析出血清，离心，4000rpm,10min。在无菌条件，吸出血清，分装（～），贮于-80℃以下冰箱，或冻干后贮存于4℃冰箱保存。