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生物合成;本章主要内容OVERVIEW;目的要求;转录 (transcription) 是生物体以DNA为模板合成RNA的过程 。 ;二、复制和转录的异同点 ; ;2、复制和转录的不同点 ;三、参与转录的物质;5′···GCAGUACAUGUC···3′;原核生物转录的模板和酶 Templates Enzymes in Prokaryotic Transcription;一、原核生物转录的模板;5′···GCAGTACATGTC ···3′;不对称转录(asymmetric transcription)。它有两方面含义:在DNA分子双链上,一股链用作模板指引转录,另一股链不转录;其二是模板链并非总是在同一单链上。;;(一)RNA聚合酶能直截了当启动RNA链的合成;DNA聚合酶在启动DNA链延长时需要引物存在,而RNA聚合酶不需要引物就能直截了当启动RNA链的延长。 RNA聚合酶和DNA的特别序列——启动子(promoter)结合后,就能启动RNA合成。;(二)RNA聚合酶由多个亚基组成;核心酶 (core enzyme);RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合 ;三、RNA聚合酶结合到DNA的启动子上起动转??;调控序列中的启动子是RNA聚合酶结合模板DNA的部位,也是控制转录的关键部位。原核生物以RNA聚合酶全酶结合到DNA的启动子上而起动转录,其中由σ亚基辨认启动子,其他亚基相互配合。 对启动子的研究,常采纳一种巧妙的方法即RNA聚合酶保护法。;RNA聚合酶保护法;;RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合:;转录开始的第一个碱基(+1)。原核生物中常为A或G,而且位置固定。;原核生物的转录过程 The Process of Transcription in Prokaryote;RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。 DNA双链解开,使其中的一条链作为转录的模板。;2、 DNA双链局部解开,形成开放转录复合体(open transcription plex) ;;转录空泡(transcription bubble):;第一个磷酸二酯键生成后,σ亚基即从转录起始复合物上脱落,核心酶连同四磷酸二核苷酸,接着结合于DNA模板上,酶沿DNA链前移,进入延长时期。 ;E、coli的转录起始和延长 ;二、 原核生物的转录延长时蛋白质的翻译也同时进行;;转录过程的电镜照片;依赖Rho 因子的转录终止。 非依赖Rho因子的转录终止。;ρ因子是由相同亚基组成的六聚体蛋白质,亚基分子量46kD。 ρ因子能结合RNA,又以对poly C的结合力最强。 ρ因子还有ATP酶活性和解螺旋酶(helicase)的活性。;与RNA转录产物结合,结合后ρ因子和RNA聚合酶都可发生构象变化,从而使RNA聚合酶停顿,解螺旋酶的活性使DNA/RNA杂化双链拆离,利于产物从转录复合物中释放 。;(二) 非依赖 Rho因子的转录终止;1、 有回文序列;;茎环结构使转录终止的机理:;真核生物的转录过程 The Process of Transcription in Eukaryote;一、 真核生物有三种DNA依赖性RNA聚合酶;真核生物的RNA聚合酶;真核生物RNA聚合酶的结构比原核生物复杂,所有真核生物的RNA聚合酶都有两个不同的大亚基和十几个小亚基、 RNA聚合酶Ⅱ由12个亚基组成,其最大的亚基称为RBP1。 RNA聚合酶Ⅱ最大亚基的羧基末端有一段共有序列(consensus sequence)为Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重复序列片段,称为羧基末端结构域(carboxyl-terminal domain, CTD)。 CTD关于维持细胞的活性是必需的。;二、转录起始需要启动子 、RNA聚合酶和转录因子的参与;(二)RNA聚合酶II的启动子; 3、CAAT盒: 一般位于-75附近,其一致序列为GGC/TCAATCT, 估计控制着转录起始的频率。 4、增强子(enhancer): 一般都在-100以上,能使和它连锁的基因转录频率明显增加的DNA序列。;;增强效应十分明显 增强效应与其位置和取向无关 大多为重复序列:一般长约50bp 增强效应有严密的组织和细胞特异性 没有基因专一性 许多增强子还受外部信号的调控 ;转录因子transcriptional factors;Ⅱ型基因中的四类转录因子 ;(三) 转录起始前复合物;;三 、真核生物转录延长过程中没有转录与翻译同步的现象;;5?------AAUAAA-;四、真核生物的转录终止和加尾修饰同时进行;真核与原核生物转录的主要差别;真核生物RNA的加工 Post-transcriptional Modification of Eukaryotic RNA;真核生物转录生成的R