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PCR 引物设计流程详解本文目的：复制出 IL-4 基因片段 一、查找基因序列 1、进入 NCBI 主页，下拉选框选择 Nucleotide，在搜索栏输入要查找的目的基因，即 IL-4，点击搜索 2 、在搜索结果选择灵长类（Homo sapiens） 2、在灵长类 IL-4 基因中选择需要的 mRNA 序列 3、查看基因的相关信息 外显子区域 CDs 区域 4、点击 FASTA 格式，并将序列保存到文档 二、使用 primer premier 5.0 设计引物 1、建立新文件，将所得的序列复制进输入框内 2、点击搜索按钮，搜索引物 3、设置引物设计参数（因为在之前查找基因序列的时候获知，外显子区域分别为：1-200、201-248、249-425、426-618，又知在引物设计时引物位置最好跨越一个内含子，PCR 产物长度通常为 100-150bp，故设定上游引物位置为201-248，下游引物位置为 249-425，产物长度为 100-150bp） 4、确认条件后，显示搜索结果 4、双击选中得分最高的引物查看引物情况 （上图为上游引物情况，下图为下游引物情况） 5、将设计的上下游引物复制出来，保存到文档中 三、使用 oligo 6.0 对设计的引物进行评价 1、建立新文件，将从 cnki 上获得的 cDNA 复制进输入框，并点击 accept 接收 2、接收后显示出该序列的相关信