实验五酶的特异性.docx

实验五 酶的特异性 【目的】 验证酶催化的特异性。 【原理】 酶的催化作用具有高度的特异性，即对作用底物有选择性。淀粉酶催化淀粉水解， 生成麦芽糖和少量葡萄糖。麦芽糖和葡萄糖均属还原性糖，可使班氏试剂中二价铜离子 （Cu2+）还原成亚铜，生成砖红色的氧化亚铜（Cu O）沉淀。但淀粉酶不能水解蔗糖，而蔗 2 糖本身不具有还原性，因此不能与班氏试剂产生颜色反应。本实验通过在不同溶液中加入班氏试剂共共热，是否产生砖红色氧化亚铜沉淀，来观察唾液淀粉酶对两种底物是否均产生催化作用，从而验证酶的特异性。 【器材】 试管、滴管、试管架、电热恒温水浴箱、沸水浴。 【试剂】 1%淀粉溶液 取可溶性淀粉 1g，加 5ml 蒸馏水，调成糊状，再加 80ml 蒸馏水，加热并不断搅拌， 使其充分溶解，冷却后用蒸馏水稀释到100ml。 1%蔗糖溶液 称取蔗糖 1g，加蒸馏水至 100ml。 0.2mol/L Na HPO 溶液 2 4 称取 28.40gNa HPO 溶于 1000ml 蒸馏水中。 2 4 pH6.8 缓冲液 取 0.2mol/LNa HPO 溶液 772ml，0.1mol/L 柠檬酸溶液 228ml，混合后即成。 2 4 4.班氏试剂 溶解结晶硫酸铜（CuSO4·5H2O）17.3g 于 100ml 热蒸馏水中，冷却后稀释至 150ml， 此为第一液。取柠檬酸钠 173g 和无水碳酸钠 100g 加水 600ml，加热溶解，冷却后稀释至 850ml，此为第二液。将第一液缓慢倒入第二液中，混匀后即成。 【 操 作 】 1．稀释唾液的制备 用清水漱口数次之后，含蒸馏水约30ml，作咀嚼运动，数分钟后吐入烧杯中，用数层纱布过滤即成。 2．煮沸唾液的制备 取上述稀释唾液一半，放入沸水中煮沸5 分钟即成。3．取 3 支试管，标号，按下表操作： 表 3-7 酶的特异性操作步骤 加入物（滴） 1 2 3 pH6.8 缓冲液 20 20 20 1%淀粉溶液 10 10 － 1%蔗糖溶液 － － 10 稀释唾液 5 － 5 煮沸唾液 － 5 － 班氏试剂 将各管混匀，置 37℃恒温水浴箱中保温 10 分钟后取出 20 20 20 将各管混匀，置沸水浴中煮沸 3～5 分钟，观察结果。 【结果及分析】 观察三管颜色变化的不同，解释其原因。 【思考题】 1．酶促反应有哪些特点？ 2．何谓酶的特异性，酶的特异性有哪些？